Mikroskop işletim yazılımını başlatarak başlayın. Kurulum sekmesi altında, önceden tanımlanmış doğru plaka tipini seçin. Plakayı konumlandırmak için plaka aşamasına erişmek için eject'e basın ve ardından plakayı mikroskoba yüklemek için load'a basın.
Ardından, sayısal açıklığı 0,4 olan 20 kat hava hedefini seçin. Seçilen plaka tipinin plaka kalınlığı için 20x hava hedefinin düzeltme bileziğini ayarlayın. Kanal seçimini Hoechst 33342 olarak ayarlayın ve Hoechst kanalı için görüntüleme parametrelerini ayarlayın.
Plaka içinde bir temsilci seçerek seçilen ayarları test edin. Tanımlı düzende, tüm plaka kutularını ve alanları seçin. Ardından, verileri çevrimiçi analiz yazılımına aktarmak için çevrimiçi işler altındaki ilgili klasörü seçin.
Deneme ayarları kaydedilir. Deneyi çalıştır sekmesi altında görüntülenecek plakaya isim verilir ve görüntüleme işlemi başlatılır. Görüntü analizine başlamak için önce yazılımı başlatın, analiz edilecek görüntüleri seçin ve ardından görüntü segmentasyonunu başlatmak için görüntü analizi sekmesine tıklayın.
Ardından, yeni bir yapı taşı eklemek için giriş resmi sekmesindeki artı işaretine tıklayın. Listeden çekirdek bul'a tıklayın. Görüntü üzerinde segmentlere ayrılmış nesneleri inceledikten sonra en uygun segmentasyon yöntemini seçin.
Segmentasyon yöntemi içinde algılama parametrelerini ayarlayın. Sonuçları tanımla'ya tıklayın ve yöntem olarak standart çıktıyı seçin. Analiz ardışık düzenini kaydetmek için analizi veritabanına kaydet'e tıklayın.
Toplu analiz sekmesi altında, yöntem seçeneğinin altında görünecek olan kaydedilmiş işlem hattına tıklayın. Ardından analiz edilecek verileri seçin. Hücre sayıları için veri kümesi oluşturmak üzere analizi başlat'a tıklayarak analizi başlatın.
Açıklanan hücre bazlı tahlil, ATG4B aktivitesindeki değişiklikleri dolaylı olarak yansıtan ve ATG4B aktivitesinin hem inhibitörlerinin hem de aktivatörlerinin saptanmasını sağlayan bir raportör okumasına dayanır. Her bir bileşiğin ATG4B aktivitesinin hücre canlılığına oranı, ATG4B inhibitörlerinin tanımlanması için bir kesme değeri olarak kullanılır. Birden büyük oranlar olası ATG4B aktivatörlerini, birden küçük oranlar ise olası ATG4B inhibitörlerini gösterir.
