In Vitro Drug Validation to Assay Ion Channel Function in Cancer Cells

Başlamak için, IC50'yi belirlemek için hücreleri HEPES tamponu olmadan antibiyotik içermeyen ortam başına 75 mikrolitrede kaplayın. İkinci gün, yüksek konsantrasyonlu stok çözeltilerinin seri seyreltmelerini gerçekleştirerek kontrol çözeltisini ve test çözeltilerini hazırlayın. Hücrelere kontrol ve test solüsyonları eklendikten sonra, hücreleri nemlendirilmiş bir ortamda 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte 48 saat inkübe edin.

Deneyin üçüncü gününde kullanımdan önce herhangi bir çökelmiş reaktifi tamamen çözmek için önce MTS reaktifini vorteksleyerek hücre proliferasyon testine başlayın, çözülmüş MTS reaktiflerini steril, 25 mililitrelik bir reaktif rezervuarına aktarın. Numuneler ve 100 mikrolitre kültür ortamı içeren 96 oyuklu plakanın her bir oyuğuna 20 mikrolitre MTS reaktifi pipetleyin. Plakayı 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte nemlendirilmiş bir ortamda bir ila dört saat inkübe edin.

Ardından, absorbans okumasını engelleyebilecek kabarcıkları gidermek için plakayı oda sıcaklığında santrifüjleyin. Absorbansı bir mikroplaka okuyucu veya spektrofotometre ile 490 nanometrede ölçün. Artan ilaç konsantrasyonları ile bir MTS testinin kalorimetrik sonuçlarını gösteren 96 oyuklu bir plaka sunulmaktadır.

Doz yanıt eğrisi, test ajanının kanser hücrelerinin canlılığını doza bağlı bir şekilde bozduğunu gösterdi.