Buz üzerinde 1.5 mililitrelik bir mikrosantrifüj tüpünde, 10 mikrolitre hücresiz ekstraktı dört mikrogram plazmit DNA ve 25 mikrolitre 2X hücresiz protein sentezi tamponu ile birleştirin. Hücresiz protein sentezi çözeltisini hazırlamak için çift damıtılmış su ile toplam 50 mikrolitre hacme kadar yapın. 0.75 gram agarozu tartın ve% 0.75 agaroz hazırlamak için 100 mililitre çift damıtılmış su tamponuna ekleyin.
%0.75 agarozu yüksek güçte 30 saniyelik patlamalarla mikrodalgaya koyun ve 50 mikrolitre erimiş agarozu 1.5 mililitrelik mikrosantrifüj tüplerine veya istenen şekle sahip kalıplara pipetleyin. Erimiş agarozu 50 santigrat dereceye ayarlanmış bir ısı bloğuna yerleştirin ve agarozun soğumasına izin verin, ancak polimerize olmasın. Daha sonra erimiş agarozu hücresiz protein sentezi solüsyonu ile pipetleyerek ve pipet ucuyla karıştırarak karıştırın.
Jellerin oda sıcaklığına soğumasını ve yaklaşık iki dakika polimerize olmasını bekleyin. Polimerize agarozu bir spatula ile 1.5 mililitrelik mikrosantrifüj tüplerine aktarın ve sıvı nitrojen içinde hızlı dondurun. Flaş donmuş hidrojelleri bir saat boyunca eksi 80 santigrat derece depoya koyun.
Bundan sonra, mikrosantrifüj tüpü kapaklarını çıkarın. Tüpleri bir balmumu filmiyle örtün ve nemin kurumasını sağlamak için filmi delin. Dondurarak kurutucunun sıcaklığını eksi 20 santigrat dereceye ve basıncı 0,1 milibara ayarlayın ve hücresiz protein sentez cihazlarını 18 saat veya gece boyunca dondurarak kurutun.
Dondurularak kurutulmuş cihazları fazla sıvı olmadan 50 mikrolitre çift damıtılmış su ile 30 dakika boyunca yeniden sulandırın ve jelleri bir spatula kullanarak 384 oyuklu siyah bir mikrotitre plakasına aktarın. Son olarak, mikrotitre plakasını bir plaka okuyucuya yerleştirin ve floresan algılama ve analizi için ekranda gösterilen plaka okuyucu ayarlarını kullanın. E.coli hücre lizatları kullanılarak bir hidrojel içinde eGFP ve mCherry'nin hücresiz protein sentezi bu şekilde gösterilmiştir.
% 0.75 agaroz jeller, dört mikrogram eGFP veya mCherry şablonu veya dört mikrogram hem eGFP hem de mCherry şablonu ile DNA şablonu olmadan hazırlandı. İki kanalın bir kaplaması da gösterilir ve kaplama, diferansiyel girişim kontrast görüntüsünü içerir. Sonuçlar, agarozda hem mCherry hem de eGFP'nin birlikte ekspresyonunu doğruladı.
