Trombosit reseptör agonisti, Kollajenle İlişkili Peptit Çapraz Bağlı veya CRPXL kullanarak teste başlamak için, test tamponundaki CRPXL stoğunun uygun bir miktarını maksimum trombosit agregasyonunu indüklemek için uygun bir konsantrasyona seyreltin. Ortaya çıkan çözüm bundan böyle standart olarak anılacaktır. Daha sonra, aynı en yüksek hazırlanmış konsantrasyonlardan başlayarak, hem standart hem de test reaktifi için sırayla iki kat seri seyreltme gerçekleştirin.
%100'den %0'a kadar agregasyon yanıtları üreten tahlil tamponunda hem test hem de standart için altı ila sekiz noktalı bir seyreltme serisi hazırlayınTrombositten zengin plazma veya PRP kullanıma hazır olduğunda, ışık geçirgenliği agregometri küvetine bir dizi PRP ekleyin. Numunelerin tutma kuyucuklarında birkaç dakika 37 santigrat dereceye kadar ısınmasına izin verin. Uygun şekilde ısıtıldıktan sonra, izleri kaydetmeye başlamak için küvetleri toplayıcıya yerleştirin.
Sürekli karıştırarak agonisti ekleyin ve verileri kaydedin. Standardın ve test reaktifinin hazırlanan her seyreltilmesi için veri toplama işlemini gerçekleştirin. Standart ve test için konsantrasyon eğrilerinin paralel olup olmadığını kontrol etmek için Graphpad Prism veya herhangi bir uygun yazılım paketini kullanın.
Verileri, x ekseni konsantrasyonları içerecek şekilde ve y ekseni maksimum toplama yüzdesi veya eğrinin altındaki alanla gösterilen yanıtları içerecek şekilde girin. Ardından, konsantrasyon değerlerini karşılık gelen logaritmalara veya log konsantrasyonuna dönüştürün. Analiz fonksiyonlarından doğrusal olmayan regresyonu seçin ve doz yanıtı stimülasyonu için denklemi kullanın.
Günlük agonisti ve yanıt değişkeni eğimini seçin ve veriler için hangisinin en iyi olduğuna bağlı olarak üç veya dört yönlü bir uyum kullanın. Karşılaştırma sekmesine tıklayarak ve veri kümelerini karşılaştırarak oluşturulan eğrilerin paralel olup olmadığını belirleyin. Testin eğim ve asimptotlarının ve standart eğrilerin eşdeğer olduğundan emin olun.
Bu koşullar karşılanırsa, doğrusal olmayan regresyon eğrisi uydurmasını kullanarak potensi veya EC50'yi hesaplamaya devam edin. Standardın EC50 değerini testin değerine bölerek bağıl gücü hesaplayın. Standarda göre potens farkını hesaba katmak için test reaktifinin hacim konsantrasyonu başına kütleyi ayarlayın.
Standart ve test reaktifi için trombosit agregasyon izleri, iki agregasyon yanıtı arasındaki farkı ortaya çıkardı. Mililitre başına 0.075 mikrogramda, standarda net bir yanıt verilirken, test için karşılık gelen konsantrasyon yanıt vermedi. Standart ve test reaktifinin EC50 değerleri, konsantrasyon yanıt eğrisi çizilerek hesaplandı.
