Başlamak için, daha önce serbest bırakma kokteyli ile intraserebroventriküler olarak enjekte edilen anestezi uygulanmış sıçana subkutan analjezi uygulayın. Fareyi stereotaksik çerçeveye monte edin. Kulak çubuklarını kullanarak başı sabitleyin, öne ve arkaya doğru dönme hareketinin engellenmemesini sağlayın.
Boynun arkasını düzgün bir şekilde uzatmak için başınızı 40 derecelik bir açıyla aşağı doğru sabitleyin. Boyun kürkünü bir tıraş bıçağı kullanarak tıraş edin ve steril pamuklu çubuklar kullanarak cildi üç alternatif %10 povidon iyot ve alkol ile dezenfekte edin, her seferinde üç ila beş saniye boyunca farklı yönlere sürün. Parmak ucuyla, oksipital çıkıntı ile atlasın omurgası arasındaki yuvarlak şekilli bastırılabilir alanı tanımlayın.
Bu noktayı bir işaretleyici kullanarak işaretleyin. Bir mililitrelik bir şırıngayı stereotaksik çerçeveye sabitleyin. İğneyi işaretteki cilde temas edecek şekilde konumlandırın.
Forseps kullanarak, şırıngayı cilt katmanlarından geçirirken cildi kaldırın. Şırınganın içinde negatif basınç oluşturmak için pistonu yavaşça geri çekin. Şırıngada beyin omurilik sıvısı görünene kadar iğneyi yavaş yavaş sokun.
İğneyi bu pozisyonda sabit tutun ve beyin omurilik sıvısının yavaş akışına izin verin. Beyin omurilik sıvısını 120 mikrolitreye kadar yavaşça çıkarın. Şırıngayı dikkatlice alın.
Deney hayvanının sıvı ikmalini desteklemek için intraperitoneal olarak bir mililitre normal serum uygulayın. Sıvı biyopsiyi 400 mikrolitre nöral kök hücre ortamı ile birleştirin ve mikro santrifüj tüpünü daha sonra kullanmak üzere dört santigrat derecede saklayın. Daha sonra hayvanı operasyon sonrası izleme alanına aktarın.
Sağım biyopsileri, ortalama 3.17 geçiş potansiyeline sahip nöral kök hücre kültürleri ile sonuçlandı ve dokuz geçişe bile ulaştı. Toplanan hücreler, hem yapışkan tek tabakalar hem de daha nadiren nörosferler olarak büyüdükleri Poli-D-Lizin kaplı kuyucuklara kaplandı. GFAP pozitif olan yeni izole edilmiş hücreler de hareketsiz belirteç ID3 için immüno-pozitifti ve NSE bipolar morfoloji karakteristiğine sahipti.
Biyopsi kaynaklı ve postmortem kaynaklı hücrelerin immünositokimyasal karşılaştırması, toplanan hücrelerin profilinin endojen subependimal zon hücrelerine benzer olduğunu gösterdi. Büyüme faktörü, SOX2 hücrelerinde eşzamanlı ve anlamlı bir artışa ve her iki örnekte de çift kortin pozitif nöroblastların azalmasına neden oldu.
