Mantar kütüphanesinden EPF geri kazanımı için, mantar izolatlarını çeyrek mukavemetli bir SDA plakasına sürerek başlayın. Conidia hasadından önce 10-14 gün boyunca karanlıkta 25 santigrat derecede inkübe edin. Bunu takiben, 2-3 mL %0.03 Tween 80'i kültürlü bir tabağa pipetleyin.
Ardından conidia'yı kazımak için bir aşılama halkası kullanın. Ardından, mantar süspansiyonunu bir santrifüj tüpüne aktarın. Süspansiyonu en yüksek hızda kuvvetlice girdaplayın, ardından conidia sayısını saymak için bir numuneyi bir hemositometreye pipetleyin.
İstenilen konsantrasyon elde edilene kadar süspansiyon içindeki conidia'yı %0.03 Tween 80 kullanarak seyreltin. Aşılama odasını hazırlamak için önce alttaki Petri kabını kalıp olarak veya makasla kullanarak 9 santimetre çapında bir yaprak diski kesin. Daha sonra, bir mikrodalga kullanarak her yemek için% 1.5 su agar hazırlayın.
30 mL soğutulmuş su agarını Petri kabına dökün ve laminer akış başlığında katılaşmasına izin verin. Agar yüzeyi yarı katı olduğunda, yaprak diskini abaksiyal yüzeyi yukarı bakacak şekilde yerleştirin, ardından agar içine gömmek için hafifçe bastırın. Şimdi, yaprak diskine 20 apterous yetişkin yerleştirin.
0.3 mL conidia süspansiyonunu doğrudan yaprak bitlerine ve yaprak diskine püskürtmek için aşılama odasının kapağını açın. Süspansiyon kuruduktan sonra, hardal yaprak bitlerinin boğulmasını önlemek için kapağı kapatın. Daha sonra, yüksek nem dağını korumak için aşılama odasını parafin film kullanarak kapatın.
Odayı, her biri 12 saatlik açık ve koyu fotoperiyodu olan 25 santigrat derece sıcaklığa ayarlanmış bir inkübatöre yerleştirin. 5 gün boyunca her 12 saatte bir mortaliteyi saymak için stereomikroskop kullanın. Virülans taraması, hardal yaprak bitleri için tutarlı bir hayatta kalma oranı ortaya çıkardı ve kontrol grubu% 85 hayatta kalma oranı sergiledi.
Cordyceps cateninnulata en hızlı yaprak biti öldürme yeteneğini gösterdi ve aşılamadan 3 gün ve 4.5 gün sonra %50 ve %90 ahlak veya DPI ile sonuçlandı. Beauveria suşları 141, 143 ve 153, 3 DPI'da sadece% 5 mortalite ile yavaş yaprak biti öldürme yetenekleri gösterdi. Purpureocillium dışında, çoğu EPF izolatı 5 DPI içinde% 70'in üzerinde düzeltilmiş mortalite oranları sergiledi.
Beauveria bassiana, EPF izolatları arasında %100 ile en yüksek mortalite oranını göstermiştir. Virülans taraması sırasında Metarhizium türleri, Beauveria türleri, Purpureocillium lilacinum ve Cordyceps cateniannulata ile enfekte hardal yaprak bitlerinin kadavralarında EPF mikozu gözlendi.
