3,5 milimetre çapında bir biyopsi zımbası hazırlayarak başlayın. Zımba mili üzerinde kenardan beş milimetre uzakta bir nokta işaretleyin. Zımbayı sabitleyin ve şaftın işaretli distal bölümünü kesmek için iki hızlı döner alet kullanın.
Şaftı 3,5 milimetre derinlikte kesin, son 1,5 milimetreyi takılı bırakın ve ucu 90 dereceye bükün. Daha sonra, PBS'yi 900 mililitre damıtılmış suda hazırlayın ve pH'ı 7.4'e ayarlayın. Ardından, damıtılmış su ekleyerek çözeltiyi bir litrelik son hacme getirin.
İki gram paraform aldehiti kimyasal bir başlık altında 45 mililitre PBS içinde çözerek %4'lük bir paraform aldehit çözeltisi hazırlayın ve pH'ı 7.4'e ayarlarken 65 santigrat dereceye ısıtın. Paraform aldehit tamamen çözüldüğünde, çözeltinin son hacmini 50 mililitreye ayarlayın. Uygulama için enjekte edilebilir anestezik kokteylin doğru hacmini belirlemek için fareyi tartın.
Anestezi uygulandıktan sonra, standart kemirgen cerrahisi prensiplerine bağlı kalarak fareyi ameliyat masasına yerleştirin. Ardından, yanal dekübit pozisyonunda kemirgenin başının altına beş milimetre yüksekliğinde bir yastık yerleştirin. Oküler yüzeyi cerrahi bir göz mızrağıyla iyice kurulayın ve kirpikleri düzgünce düzeltin.
Anestezi uygulanmış farenin en iyi şekilde görülebilmesi için cerrahi mikroskobu ayarlayın ve zamanlayıcıyı 30 saniyeye ayarlayın. Ardından, başparmak ve işaret parmaklarını kullanarak farenin göz kapaklarını tamamen açık tutarken cerrahi mikroskobu kullanarak limbal alan çevresini inceleyin. Şimdi sterilize edilmiş zımba trephine'i aşağı doğru basınç uygulamadan göz eksenine paralel olarak dikkatlice tutun.
Aleti döndürmekten kaçının ve zımba trephine'in eksenini dünyanın eksenine paralel tutun. Cerrahi asistandan zımba trefinin deliğine üç damla sodyum hidroksit çözeltisi koymasını isteyin. 30 saniye sonra, beş mililitre PBS kullanarak kornea ve forniksi temizleyin.
Ardından, yaralı gözün kornea yüzeyinde yedi ile 7,5 arasında bir pH değeri sağlamak için evrensel bir pH indikatör kağıdı kullanın. İşlemden sonra, punch trephine ve ameliyat masasını% 70 etanol ile yıkayın, kurutun ve sterilize edin. Anestezi uygulanmış bir farenin gözlerini yarık lamba biyo mikroskobu altında inceleyin ve görüntü yakalamak için bir kamera kullanın.
Ardından% 0.1 floresan göz damlası uygulayın ve fazla floresan sıvıyı pamuklu bir aplikatör ile ıslatın. Kobalt mavisi filtresini kullanarak kornea epitel kusurlarının olası varlığını değerlendirin ve fotoğraf çekin. Daha sonra, üçlü antibiyotik oftalmik merhemi hasarlı oküler yüzeye uygulayın.
Medial karnkülü ve tüm palpe edilebilir konjonktivayı korurken gözü çekirdeklendirin. Cerrahi mikroskop altında, karınkül ve cilt arasındaki bağlantıyı hassas bir şekilde inceleyin. Diş forsepslerini kullanarak, karunkülü geri çekin ve cerrahi makası palpe edilebilir konjonktivanın altında, tarsal plaka ile birleştiği yere doğru yönlendirmeye yardımcı olun.
Konjonktivayı yapışma çizgisi boyunca lateral kantusa doğru kesin. Daha sonra cerrahi makası subkonjonktival düzlemde konjonktiva ve inferior tarsal plakanın birleştiği yere çevirin. Şimdi başparmak ve işaret parmaklarını kullanarak üst ve alt göz kapaklarını burun tarafından geri çekin.
Geri çekilirken, kavisli uçlu cımbızın ucunu çıkıntılı gözyaşı bezinin arkasına yönlendirin ve optik sinire doğru hareket ettirin. Optik siniri sıkıca kavrayın ve küreyi çıkarın. Daha sonra, küreyi PBS ile durulayın ve sabitleme çözeltisine aktarın.
Bir fare modelinde kornea ve limbal alkali yaralanması sonrası fare gözünün yara iyileşme süreci gösterilmiştir. Kornea ödemi sıfırıncı ve ikinci günlerde belirgindir, fibrozis ise yaralanmadan sonraki ikinci haftada daha belirgindir. Epitel defekti, 12 ila 14 gün içinde merkezcil bir düzende konjonktival epitel hücre göçü ile iyileşti.
Bununla birlikte, yaralanan gözlerin %50'sinde ikinci haftanın sonunda kalıcı epitel defektleri gelişti.
