Hücre tohumlamaya başlamak için, hücreleri mekanik veya enzimatik yöntemler kullanarak ayırdıktan sonra sayın. Bir mikro pipet kullanarak, kabarcıklardan kaçınarak önceden hazırlanmış elektron mikroskobu ızgaraları içeren altı oyuklu plakaya oyuk başına hesaplanan hücre sayısını ekleyin. Kuyucuk başına 1.5 ila 2.0 mililitre hücre süspansiyonu sağladığınızdan emin olun.
HIV moleküler klonlarının transfeksiyonu için, hücreleri 37 santigrat derecede 16 ila 24 saat inkübe edin. Temiz bir mikro santrifüj tüpüne 50 mikrolitre serumsuz DMEM ve bir mikrogram DNA ekleyin. Her biri için, serum içermeyen DMEM'de üç mikrolitre transfeksiyon reaktifini ayrı bir temiz mikro santrifüj tüpüne iyice seyreltin.
Karışımı bir mikro pipet kullanarak ayrı olarak homojenize edin. Daha sonra transfeksiyon reaktif karışımını mikro pipet ile DNA karışımına ekleyin ve oda sıcaklığında 15 dakika inkübe edin. Bundan sonra, 100 mikrolitre transfeksiyon reaktifi ve DNA karışımını doğrudan ızgaraların üstündeki her bir oyuğa damlatın.
Transfeksiyondan 16 ila 24 saat sonra büyüme ortamını değiştirin. Ko-transfeksiyon aşamasını takip eden 24 saat mikroskopi ve floresan benzeri mikroskopi, tüm ızgaraların karbon tabakasında minimum yırtılmaya sahip olduğunu gösterdi. Hem sahte ızgaralardaki hem de birlikte transfekte edilmiş ızgaralardaki hücreler, birden çok ızgara karesinde canlı hücreler içeriyordu.
