Başlamak için, toplanan serebral kan pıhtısı örneklerini cımbız kullanarak temiz bir tabağa yerleştirin. Daha sonra, bir pipet kullanarak, üzerine beş mililitre fizyolojik salin ekleyin ve tabağı hafifçe sallayın. Bir pipet kullanarak salini çıkarın.
Bir makas kullanarak pıhtıları küçük parçalar halinde doğrayın. Bir kez daha, pıhtılara beş mililitre fizyolojik salin ekleyin ve salini bir pipetle aspire etmeden önce tabağı hafifçe sallayın. Ardından, cımbız kullanarak pıhtı parçalarını yeni, temiz bir U plakasına aktarın.
Fizyolojik salin kullanarak SFE konsantrasyonunu mililitre başına 2.000 birime ayarlayarak SFE çalışma solüsyonunu hazırlayın. Ön işlemden geçirilmiş pıhtılara 300 mikrolitre SFE çalışma solüsyonu ekleyin. İlk bozunma turunu başlatmak için, SFE ve pıhtı karışımını yarım saat boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin.
Bundan sonra, SFE ile muamele edilmiş numuneyi karıştırmak için hafifçe sallayın. Temiz bir pipet kullanarak sıvı kısmı steril bir tüpe aktarın. Kalan pıhtıyı başka bir bozulma turu için bir kenara koyun.
Toplanan sıvıyı 200 G'de dört santigrat derecede beş dakika santrifüjleyin. Ardından, bir pipet kullanarak, süpernatanı veya geri kazanılan SFE çözeltisini başka bir temiz tüpe aktarın. Elde edilen hücre peletini 50 mikrolitre fizyolojik salin içinde hafifçe karıştırarak yeniden süspanse edin.
Bundan sonra, daha önce gösterildiği gibi geri kazanılmış SFE çözeltisini kullanarak kalan pıhtılar üzerinde müteakip bozunma turları gerçekleştirin. Kan hücresi örneğini hazırlamak için her bozunma turundan hücre karışımını toplayın. Elde edilen hücre örneğinden beş mikrolitreyi poli-L-lizin kaplı cam slayta ekleyin.
Ve bir kapak fişi kullanarak hücreleri sürün. Sıvının oda sıcaklığında buharlaşmasına izin verin. Hücre boyama yapmak için, hücre yaymasına yavaşça 100 mikrolitre doğru boya ekleyin.
Boyayı temiz suyla nazikçe durulamadan önce hücrelerin oda sıcaklığında 30 dakika lekelenmesine izin verin. Son olarak, lekeli hücreleri bir ışık mikroskobu kullanarak inceleyin. Bozunmanın erken evresinde renksiz bir çalışma çözeltisine sahip kompakt kırmızı kan pıhtıları gözlendi.
30 dakikalık bir inkübasyondan sonra pıhtı çözünmesi gözlendi ve beş saate kadar uzun süreli bir inkübasyon çoğu pıhtıyı çözerken, negatif kontrol grubunda 10 saatlik bir inkübasyondan sonra bile önemli bir değişiklik olmadı. Doğru boyamadan sonra, olgun kırmızı kan hücreleri, trombositler ve çeşitli granülositler ışık mikroskobu altında açıkça tanımlandı. Hücre bileşenleri, otohematoloji yardımıyla başarılı bir şekilde kantitatif olarak analiz edilebilir.
