Başlamak için, plasental örneklerin tüketim parçalarını PBS'ye yerleştirin. Koryonik plakayı, maternal desiduayı ve numunedeki görünür enfarktüsleri atın. Kalan doku örneğini, yaklaşık 0.5 santimetre kesit çapına sahip villöz eksplantlara diseke edin.
Eksplantları taze PBS ile doldurulmuş bir Petri kabına aktarın. Bir çift forseps ile, tüm kanı çıkarmak için PBS'deki her bir eksplant'ı sallayın. Steril bir başlık altında, beş odayı rezervuar şişesine bağlamak için luer kilitleri kullanın.
Odaları baş aşağı ters çevirin ve altını çıkarın. Şimdi metal plakaları, pimler yukarı bakacak şekilde odaların üst kısımlarına merkezi olarak yerleştirmek için forseps kullanın. Odaların yarısını bir mililitre önceden ısıtılmış kültür ortamı ile doldurun.
Hazneye 20 mililitre daha ortam ekleyin. Forseps ile, villöz eksplantını haznedeki metal plakanın iğnelerine dikkatlice yerleştirin. Dört eksplantı tek bir odaya yerleştirin.
Kapatmak için odaların altını tekrar takın. Ardından, akış devresini biyoreaktör içindeki peristaltik pompaya bağlamak için pompa borusunu pompaya bağlayın. Dördüncü aşamada düzeltin.
Pompalar menüsü altında, Manuel modu seçin. Pompa hızını dakikada bir mililitreye ayarlayın ve pompalamaya başlamak için Çalıştır'a tıklayın. Tam dolumu sağlamak için doldurma sırasında hazneleri belirli bir açıyla tutun.
Doldurma işlemi bittiğinde, hazneyi tekrar ters çevirin. Odaların sağlam olduğunu onaylayın ve biyoreaktörün her iki kapağını da kapatın. Doku inkübasyonu tamamlandıktan sonra, pompayı durdurmak için İptal'e tıklayın.
Bir seferde iki biyoreaktör kapağını ve bir akış odasını açın. Daha fazla analiz için eksplantları metal plakadan dikkatlice çıkarmak için forseps kullanın. İmmünohistokimyasal olarak boyanan eksplantlar, taze ve akış kültür dokusunda hücre iskeletinin iyi yapılandırılmış ve organize bir görsel sunumunu gösterdi.
Zamanla, statik eksplantlarda mikrofilament agregasyonu giderek daha fazla gözlendi ve bu da hücre iskeleti yapısının bozulmasına işaret etti. Yetiştirme süresi boyunca azalan doku bütünlüğü, hematoksilen ve eozin ile doğrulandı. Taze dokular yoğun ve sıkıca paketlenmiş bir stroma gösterdi.
48 saatlik akış kültüründen sonra, sinsitiyotrofoblastın kısmen ayrılmış fragmanları görüldü. Doku bütünlüğü, 48 saat sonra daha da kötüleşen statik bir kültür durumunda 24 saat sonra zaten yetersiz bir şekilde korunmuştur. Endotel hücre boyaması, taze dokuda belirgin şekilde organize edilmiş hücreler gösterdi.
Morfolojik bütünlük, akış kültürlerinde 48 saat sonra bile geniş ölçüde korunmuştur. Bununla birlikte, statik eksplant, 24 saat sonra bile kısmi çökme sergiledi ve bu da 48 saat sonra daha da kötüleşti.