MCF-7 hücrelerini, dört santigrat derecede üç dakika boyunca 560-G'de santrifüjleme yoluyla hasat edin. Altı hücreye 500 mikrolitre tamponlu RL-1 beş kez 10 ekleyin ve hücre kütlesi görünmeyene kadar iyice karıştırın. Daha sonra, hücre homojenatlarını toplama tüpüne gömülü bir DNA temizleme kolonuna aktarın.
Numuneleri 85-50-G'de iki dakika, dört santigrat derecede santrifüjleyin. Santrifüjlemeden sonra, süpernatanı toplama tüpünde tutarak DNA temizleme kolonunu çıkarın. 800 mikrolitre tampon RL-2 ve 500 mikrolitre süpernatan ekleyin ve hafifçe karıştırın.
Daha sonra, karışımın 700 mikrolitresini toplama tüpüne gömülü sadece RNA kolonuna aktarın. Tüpü 8, 550-G'de bir dakika boyunca dört santigrat derecede santrifüjleyin. Ardından toplama tüpündeki akışı atın.
Yalnızca RNA sütununu önce 500 mililitre tampon RW-1 ile ve ardından 700 mililitre tampon RW-2 ile, her yıkamada 8, 550-G ve dört santigrat derecede bir dakika santrifüjleyerek yıkayın. Kalıntı RW-2'yi tekrar santrifüjleyerek çıkardıktan sonra, sadece RNA kolonunu yeni bir toplama tüpüne aktarın. Sadece RNA sütunundaki zarın merkezine 65 santigrat derecede önceden ısıtılmış 100 mikrolitre RNA içermeyen deiyonize su ekleyin ve iki dakika bekleyin.
Daha sonra RNA çözeltisini toplamak için dört santigrat derecede bir dakika boyunca 8.550-G'de santrifüjleyin. PCR için reaksiyon karışımını ayarlayın ve ardından sistemin PCR reaksiyon koşullarını ayarlayın. QRT PCR prosedürünü yürütün.
QRT PCR, silindiriklik tedavisinin pro-apoptotik faktörlerin, CC-9, CC-7, CC-3, vim ve vax'ın gen ekspresyonunu desteklediğini, anti-apoptotik BCL-2'nin gen ekspresyonunu inhibe ettiğini gösterdi. Ayrıca, silindirik öldürücü uygulama, PI-3K, AKT, M-tor, HIF1-Alfa ve Fox-01'in gen ekspresyon seviyelerini azalttı.
