Başlamak için, küçük bir parça lens kağıdını kesmek için makas kullanın ve bir Petri kabına yerleştirin. Daha sonra, bir fareden izole edilen sabit beyni ve omurgayı içeren formalini, filtre kağıdı ile kaplı bir huniye dökün. Beyni ve omurgayı boş bir Petri kabına aktarın.
Beyni altı koronal parçaya bölmek için bir neşter kullanın. Forseps kullanarak, beyin örneklerini Petri kabındaki lens kağıdının yarısına aktarın. Neşter kullanarak omuriliği üç parçaya bölün, ardından omurilik görünür hale gelene kadar sakral omurga parçasını kaudal uçta kesin.
Torasik omurgayı baskın olmayan el ile alın. Adson forsepslerini baskın elinde sıkıca kapalı dişlerle alın ve ucunu hafif bir bükülme hareketiyle omurganın daha küçük açıklığına hafifçe itin. Daha sonra, forseps kullanarak, ortaya çıkan omuriliği yavaşça kolondan dışarı çekin, kordon parçasını lens kağıdını içeren Petri kabına yerleştirin.
Bir neşter kullanarak, üç omurilik parçasını daha küçük kesit parçalarına bölün. Bu parçaları, beyin parçalarını içeren lens kağıdının aynı yarısına yerleştirin. Doku parçalarını sandviçlemek için lens kağıdını katlayın ve etiketli bir kasete yerleştirin.
Kaseti formalin içeren bir numune kavanozuna aktarın. İnkübasyondan sonra, kaseti numune kabından otomatik doku işlemcisindeki ilk formalin banyosuna aktarın ve işlemciyi gece boyunca çalıştırın. Ertesi gün, kasetleri doku işlemcisinden çıkarın ve parafin gömme istasyonunun sıcak tutma odasına aktarın, kalıbın tabanını kaplayacak şekilde parafin mumunu dökün.
İnce forseps kullanarak, beyin koronal ve omurilik kesit parçalarını kalıbın altındaki parafine yerleştirin. Beyni ve numuneleri yerine sabitlemek için kalıbı birkaç saniye soğutma yüzeyine aktarın. Kalıbı ısıtılmış yüzeye geri taşıyın ve üstüne sıcak parafin ile doldurun.
Numune kimliği ile etiketlenmiş kaset kapağını kalıba yerleştirin. Kaset kapağının üstüne parafin dökün. Balmumunun kurumasını sağlamak için kalıbı soğutma istasyonuna aktarın.
Bloklar tamamen soğuduktan sonra, bloğu döner bir mikrotom üzerine sabitleyin. Blokları kesin ve her parafin bloğunun beş mikrometre bölümünü kesin. Parafin şeridini 42 santigrat derece su banyosuna taşıyın.
Su banyosundan gelen bölümü etiketli bir slayta toplayın. Slaytları plastik bir sürgülü rafa yerleştirin ve bölümleri gece boyunca 37 santigrat derecede kuru bir fırında pişirin. Taradıktan sonra, J görüntüsünü açın, ardından analiz için bölümün tiff görüntüsünü sürükleyip bırakın.
Omurilik bölümünü dört kadranda gözlemleyin ve her kadranda demiyelinizasyon lezyonlarının varlığını puanlayın. Bu bölümün dört puanı vardır, çünkü dört kadranda da lezyonlar vardır. Bu bölüm bir puan alır, çünkü lezyonlar sadece bir kadrandadır.
CD45 boyaması lezyonlarda lökosit varlığını gösterir. Yeni lezyonlar eski lezyonlara göre daha fazla CD45 hücresi içerir. Buna karşılık, yeni lezyonlar eski lezyonlara kıyasla daha az SMI-32 pozitif akson içerebilir.
Yabani tip grubundaki fareler, tam felçli şiddetli EAE geliştirdi. OGR1-KO grubu hafif hastalık geliştirirken. Klinik skordaki bu fark, submeningeal demiyelinizasyon lezyonlarında, omurilikte boyanan miyelin alanı yüzdesindeki varyasyonlara karşılık geldi, ayrıca yüzde miyelin fraksiyonu da OGR1 ve vahşi tip fareler arasında önemli ölçüde farklılık gösterdi ve kümülatif EAE skoru ile korelasyon gösterdi.
EAE'de beyindeki inflamasyon öncelikle beyincik ve beyin sapında lokalizedir. Beyinde, meninksler, ventriküllerin yakınında ve optik sinir ve korpus kallozum gibi diğer beyaz cevher izleri de dahil olmak üzere ek iltihaplanma alanları belirgin olabilir. Küçük molekül dizisi testi ile ölçülen serum nörofilament ışığı, EAE'li farelerde sağlıklı farelere kıyasla daha yüksek serum nörofilament ışık seviyeleri tespit etti ve bu yüksek seviyeler omurilikteki SMI-32 pozitif yoğunluğu ile korelasyon gösterdi.
