Reviving the Cryopreserved Day 32 hESC-Derived Photoreceptor Progenitors

PRDM'yi 37 santigrat dereceye ayarlanmış bir su banyosuna yerleştirerek başlayın. 32. gün hESC'den türetilmiş fotoreseptör progenitör hücrelerini içeren bir kriyoviyal sıvı nitrojenden çıkarın ve kuru buz üzerinde tutun. Daha sonra kriyoviyal 37 santigrat derecede bir su banyosunda üç ila beş dakika çözdürün.

Hücreleri bir mililitre PRDM'de tekrar süspanse edin. Dört dakika boyunca 130G'de santrifüjleyin Süpernatanı çıkardıktan sonra, peleti bir mililitre PRDM'de tekrar süspanse edin. Hücreleri saymak için, 10 mikrolitre hücre süspansiyonu alın ve üreticinin talimatlarını izleyerek% 0.2 tripan mavisi ile karıştırın.

Hücre karışımını hücre sayma odası slaytına pipetleyin ve otomatik bir hücre sayacı kullanarak hücre sayısını ve canlılığını belirleyin. Hücre canlılığı %70'in üzerindeyse, kalan hücre süspansiyonunu 130G'de dört dakika santrifüjleyin. Süpernatanı çıkarın ve nakil için PRDM'deki hücre peletini yeniden süspanse edin.

10 mikrolitrelik bir pipet ucu kullanarak, hiçbir küme görünmeyene kadar mikrofüj tüpündeki hücre kümelerini yeniden askıya alın. Süspansiyonu 33 gauge enjeksiyon şırıngasına yükleyin ve hücre çözeltisinin iğneden ekstrüzyonunu onaylayın.