Başlamak için, anestezi uygulanmış bir fare alın ve göz bebeğini genişletmek için göze bir damla %1 tropikamid ve %2.5 fenilefrin uygulayın. Daha sonra kuruluğu ve anesteziye bağlı kataraktları önlemek için korneaya oftalmik bir jel uygulayın. Ardından, subretinal enjeksiyonu gerçekleştirmek için steril bir ortamda doğrudan ışık yoluna sahip dik bir ameliyat mikroskobu kurun.
10 mikrolitrelik cam şırıngayı hazırlamak için iğne göbeğini ayırın ve 33 gauge kör iğneyi takın. Metal göbek kapağını alın ve iğneyi şırıngaya sıkıca sabitleyin. Sızıntıyı ve iğne açıklığını test etmek için iğneyi damıtılmış suyla yıkayın.
Ardından şırıngayı boşaltın ve dikkatlice bir kenara koyun. Ardından, anestezi uygulanmış fareyi bir yastığın üzerine yerleştirin ve tedavi gözünü mikroskobun objektifine doğru yönlendirin. % 0.5 proparakain hidroklorür uygulayın ve 30 saniye bekleyin.
Daha sonra göze 150 mikrolitre oftalmik jel uygulayın ve yuvarlak bir kapak fişi yapıştırın. Kornea, iris, göz bebeği, lens ve konjonktivayı gözlemleyen bir ön göz muayenesi yapın. Fare gözünün fundusunu göz bebeğinden görselleştirmek için odak düzlemini ayarlayın.
Ardından kafayı, optik kafa göz bebeğinin merkeziyle aynı hizaya gelecek şekilde hizalayın. Daha sonra, tek tip bir hücre süspansiyonu elde etmek için HESC'den türetilmiş fotoreseptör progenitörleri içeren tüpün tabanına dokunun. 33 gauge künt iğneli 10 mikrolitrelik bir cam mikrolitre şırınga kullanarak, iki mikrolitre hücre karışımı çizin.
Limbusun iki milimetre arkasına yerleştirilmiş bir sklerektomi yarası oluşturmak için 30 gauge tek kullanımlık bir iğne kullanın. Lensle teması önlemek için iğnenin açısını yaklaşık 45 derecede tutun. İğne ucu göz içinde görünür hale geldiğinde, iğneyi dikkatlice geri çekin.
İğne batması yaralanmalarını önlemek için kullanılmış iğneyi keskin bir çöp kutusuna atın. Şimdi cam şırıngayı alın ve künt iğneyi sklerektomi yarasına yerleştirin. Künt iğneyi giriş yarasının karşı retinasına ulaşana kadar merceğe dokunmadan ilerletin.
Sklera üzerinde bir basınç dalı görülene kadar retinaya hafifçe nüfuz edin. Daha sonra, şırınga üzerinde hafif bir baskı uygularken, iki mikrolitre hücre süspansiyonu veya PRDM ortamını subretinal boşluğa enjekte edin. Görünür bir bleb oluşumu enjeksiyonun başarılı olduğunu gösterir.
Hücrelerin yerleşmesi için 10 saniye bekleyin. İğneyi gözden yavaşça geri çekin. Kabarcıkları görselleştirmek için, gözü mikroskop altında konumlandırmak için fare kafasını hareket ettirin ve kafayı nazikçe tutarak konumu sabitleyin.
İntraoperatif OCT için, ameliyat mikroskobundaki IOCT işlevini kullanın ve OCT ekranında küpü seçin. Ok düğmelerine basarak tarama alanını blör üzerine yerleştirin. En iyi OCT kalitesi için OCT, slayt merkezleme ve odağı ayarlamak için, bleb alanının OCT taramasını almak için yakala veya tara'ya basın ve taramaların kalitesini kontrol etmek için görüntüleri inceleyin.
Son olarak, kapak fişini çıkarın ve gazlı bez kullanarak jeli gözden nazikçe temizleyin. Enfeksiyonu önlemek için enjeksiyondan sonra bir kez antibiyotik merhem uygulayın. OCT taraması, hücre ile tedavi edilen gözde asılı duran farklı HESC varlıklarını ortaya çıkardı.
Buna karşılık, medya ile tedavi edilen göz, subretinal boşluktaki hücrelerden yoksun, bulanık olmayan sıvı gösterdi.
