Başlamak için, anestezi uygulanmış bir fareye önleyici bir analjezik enjekte edin. Makas kullanarak farenin başını tıraş edin. Hayvanı stereotaksik bir masaya yerleştirin ve kulak çubuklarını doğru şekilde yerleştirin.
Farenin ağzını fare parçasına takın ve boğulmayı önlemek için dili dikkatlice dışarıya yerleştirin. Anestezi derinliğini kontrol ettikten sonra, vücudun ve başın yatay olarak düz kalmasını sağlamak için yükseltme desteğini hayvanın altına yerleştirin. Ve hayvanın sıcaklığını korumak için kağıtla ılık bir ped kullanın.
Kuruluğu önlemek için her iki göze merhem sürün. Ardından, iyot ve alkol kullanarak farenin kafasını dezenfekte edin. Lambda dikişini göndermek için gözlerin arkasından uzanan kesi ile başın orta hattı boyunca bir kesi yapmak için bir neşter kullanın.
Kafatasını açığa çıkarın ve 0.9 sodyum klorür çözeltisine doyurulmuş steril bir pamuk ucuyla temizleyin. Stereo mikroskop altında, rostral rinal veni veya RRV'yi tanımlayın ve işaretlemek için steril bir kalem kullanın. Referans olarak steril bir iğne kullanarak, beynin yönünü doğrulayın.
DV ve ML koordinatlarında değişiklik olmadığından emin olun. Ardından, sıfır ön-arka referans için virüs solüsyonunu içeren steril bir cam pipeti RRV referansına yerleştirin. Pipeti, seçilen ön-arka koordinata ulaşana kadar sagital sütür boyunca ilerletin.
Bu noktayı steril bir kalemle işaretleyin ve iğneyi kaldırın. Superior sagital sinüsün kırılmasını önlemek için işaretli pozisyonun etrafına dikkatlice küçük bir daire delin ve kafatasının parçasını küçük forseps ile çıkarın. Ardından, mediolateral referans olarak superior sagital sinüs medyanını kullanarak, pipeti konumuna getirin ve dorsoventral referans olarak dura mater'e dokunana kadar indirin.
Dura mater'de hafif bir kırılma oluşturun ve pipeti tercih edilen dorsoventral pozisyona indirin. Belirtilen miktarda adeno ilişkili virüs veya AAV vektörlerini beyne enjekte edin ve pipeti çıkarın. Fareyi kulak çubuklarından kurtarın, ardından cerrahi klipsleri kullanarak cildi kapatın.
İyileşmek için hayvanı ayrı bir ısıtılmış kafese geçirin. Farenin iyileşmesine dikkat edin. Bilincini geri kazandığında, tamamen iyileştiğinde orijinal muhafazasına geri koyun.
