Lipitleri ve deterjanı içeren% 10'luk bir bicelle stok çözeltisi hazırlayarak başlayın. Bunu yapmak için, yüzde beş mol kolesterol ve yüzde 95 mol DMPC karışımı olan önceden kurutulmuş lipiti alın ve buna deiyonize suda CHAPSO deterjan çözeltisini ekleyin. Bir su banyosu sonicater kullanarak, çözelti berraklaşana kadar sürekli güç altında buzla soğutulmuş suda sonikasyon yaparak lipit deterjan karışımını yeniden süspanse edin.
Daha sonra 0,2 mikronluk bir santrifüj filtre yardımıyla çözünmemiş bileşenleri çıkarın. Daha sonra, buz üzerinde çalışarak, elde edilen bicelle stok çözeltisini önceden hazırlanmış protein numunesi ile bir ila dört hacimsel oranda birleştirin. Protein bicelle karışımını buz üzerinde 30 dakika inkübe edin.
Kristalizasyon için, 48 oyuklu bir plakada, eşit hacimde kristalizasyon rezervuar çözeltisi ile 0.5 veya bir mikrolitre protein bicelle karışımı karıştırın. Ardından, 48 oyuklu plakayı kullanarak asılı bir damla buhar difüzyon modunda kristalleşmeyi ayarlayın ve kristalizasyon kurulumunu 20 santigrat derecede inkübe edin. Ertesi gün, kapak camının düzgün bir şekilde kapatıldığından emin olmak için kristalizasyon tepsilerini kontrol edin.
Polarizör ile donatılmış bir masa üstü stereo mikroskop kullanarak kristal büyümesini günde en az bir kez kontrol edin. Son olarak, protein kristallerini 0.2 molar sodyum malat içine batırın ve sıvı nitrojen kullanarak 50 veya 100 mikrometre kriyo döngülerinde dondurun. Veri toplamaya uygun olgun kristaller genellikle bir ila iki hafta içinde ortaya çıktı ve genellikle 50 mikron x 100 mikron x iki mikron boyutlarındaydı.
