Formalinle sabitlenmiş, parafine gömülü beyin bölümlerini vidalı kapaklı tabaklara yerleştirerek başlayın. Kapatma solüsyonunu bulaşıklara takın, alüminyum folyo ile örtün ve bir gün çalkalarken dört santigrat derecede inkübe edin. Ertesi gün, tüm numuneleri yeni tabaklara aktarın ve daha önce gösterildiği gibi açma solüsyonu ile inkübe edin.

İnkübasyonun sonunda, numuneleri tüplere yerleştirin ve çalkalayarak iki saat boyunca PBS ile üç kez yıkayın. Daha sonra numunelere inaktivasyon solüsyonu ekleyin ve gece boyunca 37 santigrat dereceye ayarlanmış bir su banyosunda inkübe edin. Üç yıkama yaptıktan sonra, numunelere temizleme solüsyonu ekleyin ve üç ila yedi gün boyunca 55 santigrat derecelik bir su banyosunda inkübe edin.

İnkübasyonun sonunda, numuneleri bir inkübatörde üç saat boyunca 37 santigrat derecede PBST ile yıkayın. Ertesi gün, her numuneye 10 mililitre% 30 hidrojen peroksit ekleyin ve numuneleri oda sıcaklığında çalkalarken 10 dakika boyunca PBS ile üç kez yıkayın. Daha sonra, antijen alma solüsyonunu bir su banyosunda 95 santigrat dereceye ısıtın.

Numuneleri ısıtılmış çözeltiye aktarın ve 95 santigrat derecede 10 dakika, ardından bir çalkalayıcı üzerinde oda sıcaklığında 40 dakika inkübe edin. Numuneleri çalkalarken beş dakika boyunca deiyonize suyla yıkayın. Örnekleri PBS'de dengeleyin.

Şimdi numuneleri vidalı kapaklı bulaşıklara aktarın. Bir beherdeki tüm numuneler için taze primer antikor solüsyonu hazırladıktan sonra, numunelere ekleyin ve karanlıkta hafifçe çalkalayarak bir ila yedi gün boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Daha sonra numuneleri tüplere yerleştirin ve inkübatörde 37 santigrat derecede önceden ısıtılmış PBST kullanarak yıkayın.

Numuneleri vidalı kapaklı tabaklara taşıyın ve PBST ve% 0.01 sodyum azidde hazırlanan ikincil antikorları ekleyin. Numuneleri tüplere aktarın ve çalkalayarak iki saat boyunca 37 santigrat derecede üç kez ön ısıtma PBST ile yıkayın. Kırılma indisi eşleştirmesi için numuneleri yeni kaplara yerleştirin ve %30 TDE çözeltisi ekleyin.

Daha sonra numunelerde %30 TDE'yi %68 TDE çözeltisi ile değiştirin ve çalkalarken oda sıcaklığında bırakın. Kısa işlemden sonra, hem gri hem de beyaz maddede tüm doku dilimlerinin optimal ve homojen şeffaflığı elde edildi.