DNA ekstraksiyonunu gerçekleştirmek için önce göz mizahından elde edilen hücre peletine uygun miktarda hücre lizis solüsyonu ekleyin. İyice karıştırmak için çözeltiyi yukarı ve aşağı pipetleyin. Hücreler tamamen parçalandıktan sonra, toplam hacmin üçte birini oluşturmak için bir protein çökelti çözeltisi ekleyin.
Şimdi, girdap yapın ve 20 ila 30 saniye kuvvetlice karıştırın. Daha sonra oda sıcaklığında 3000 g'da üç dakika döndürün. Bu arada, 300 mikrolitre izopropanolü temiz bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın.
Santrifüjleme tamamlandıktan sonra, süpernatanı izopropanol içeren tüpe dikkatlice pipetleyin. Daha sonra, tüpe 1,5 mikrolitre glikojen ekleyin ve iyice karıştırmak için tüpü ters çevirin. DNA çökelmesini kolaylaştırmak için tüpü eksi 20 santigrat derecede bir saat veya gece boyunca bir dondurucuya koyun.
Dondurulduktan sonra, tüpü oda sıcaklığında 3000 g'da beş dakikada santrifüjleyin. Ardından, izopropanolü pipetleyin. Peletleri yıkamak için 0,5 mililitre% 70 etanol ekleyin.
Eşit yıkamayı sağlamak için tüpü hafifçe ters çevirin. Daha sonra tüpü oda sıcaklığında 3000 g'da bir dakika döndürün. Süpernatanı santrifüj tüpünden atın.
Şimdi, çözeltiyi boşaltmak ve peleti kurutmak için tüpü temiz gazlı bez üzerinde ters çevirin. Mikrosantrifüjde hızlı bir dönüşten sonra, kalan etanol damlacığını pipetlemek için ince uçlu tek kullanımlık bir pipet ucu kullanın. Daha sonra, kurutulmuş DNA peletine 45 mikrolitre DNA hidrasyon çözeltisi ekleyin.
Ardından tüpü 50 santigrat dereceye ayarlanmış bir ısıtma bloğuna yerleştirin. Göz sıvılarının hem hücresel hem de hücresiz bileşenlerinin DNA verimleri benzerdi. Vitreoretinal lenfoma ile ilişkili bir mutasyonun hücresel ve hücresiz bileşenlerinin PCR analizi yapıldı.
Hücresiz bileşende, düşürülmüş bir döngü eşiği ile gösterildiği gibi daha yüksek bir mutasyon oranı mevcuttu.