Obtaining Wildtype and Transgenic Zebrafish Larvae and WildType Whole Larvae Dissociation

İlgili üreme kurulumundan yabani tip ve transgenik zebra balığı yumurtalarını alarak başlayın. HEPES tamponlu E3 ortamı veya E3 içeren 15 santimetrelik bir Petri kabı alın. Ve istenen zebra balığı yetiştirme kurulumundan uygun miktarda döllenmiş yumurta toplayın. Döllenmiş yumurtaları E3'te 28 santigrat derecede uygun bir aydınlık ve karanlık döngü ile kuluçkaya yatırın.

Döllenmeden veya dpf'den bir gün sonra, döllenmemiş yumurtaları çıkarın ve döllenmiş olanların beş dpf'ye kadar gelişmesine izin verin. Bir dpf'de transgenik zebra balığı larvalarını seçin. Tüm larva ayrışmasına geçmeden önce, beş dpf vahşi tip larvayı %0.016 Trikain kullanarak uyuşturun ve 30 anestezi uygulanmış larvayı bir mililitre 10x tripsin-EDTA çözeltisi içeren bir Petri kabına aktarın.

Daha sonra, bir tıraş bıçağı kullanarak, larvaları Petri kabında küçük parçalar halinde doğrayın. Doğranmış larvaları iki mililitre 10x tripsin-EDTA çözeltisi içeren bir mikro santrifüj tüpüne aktarın ve tüpü üç saat boyunca buz üzerinde bırakın. Ayrışmayı uyarmak için içeriği her saat başı bir P1000 pipetle yukarı ve aşağı pipetleyin.