Farelerin kasık lenf nodundaki B16F10-GP hücrelerinin intranodal enjeksiyonu

100-U insülin şırıngası kullanarak 20 mikrolitre B16F10-GP melanom hücre süspansiyonunu aspire ederek başlayın. Şırıngadaki kabarcıkları çıkarın. Daha sonra, tümör rezeksiyonu ameliyatı geçiren bir farede, hücre süspansiyonunu bir kasık lenf düğümüne enjekte edin.

İğneyi lenf düğümünün distal ucundan sokun ve yavaşça lenf düğümünün merkezine doğru hareket ettirin. Sıvının doğru bir şekilde enjekte edildiğini gösteren lenf düğümünün önemli ölçüde şişmesini gözlemleyin. Diğer taraftaki kasık lenf noduna eşit miktarda PBS enjekte edin.

Kesiyi 3-0 dikiş kullanarak dikin. Yarayı çevreleyen cildi povidon iyot ile dezenfekte edin, ardından fareyi temiz bir kafese koyun ve kızılötesi ışık kullanarak sıcaklığı koruyun. Fareyi lateral dekübit konumunda tutun ve bilinç geri gelene kadar sürekli izleyin.

B16F10-GP hücreleri ile implantasyon sonrası hematoksilen ve eozin boyaması ile lenf nodu metastazı gözlendi. Erken evrede, metastatik lenf nodu, tümör hücreleri tarafından kısmi işgal gösterdi ve bazı bölgeler hala etkilenmemiş lenfositler içeriyordu. Geç evrede, metastatik lenf nodu, tümör anjiyogenezi ile birlikte tümör hücreleri ile doluydu.

Ayrıca, periferik kandaki antijene özgü CD8 pozitif T hücrelerinin sıklığı erken evrede %2.81 iken, geç evrede %1.48'e düşmüştür. İlginç bir şekilde, CD8 pozitif T hücrelerinin yüzdesi metastatik olmayan lenf düğümlerinde sabit kalırken, erken evrede metastatik lenf düğümünde geçici olarak artmış, ancak geç evrede keskin bir şekilde azalmıştır.