Başlamak için, 15 mikrolitre Addgene ile anestezi uygulanmış sıçan yavrularını intraperitoneal enjekte etmek için 25 mikrolitrelik bir Hamilton şırıngası kullanın. Ardından, anestezi uygulanmış altı ila sekiz haftalık yavruların saçlarını ve bıyıklarını tıraş edin. Fareyi kulak çubukları ile stereotaksik bir çerçeveye monte edin.
Ve hayvanın vücut ısısını korumak için altına bir ısıtma yastığı yerleştirin. Gazlı bezin bir sonraki yeri, kanamayı en aza indirmek için farenin kafasına buz gibi soğuk tuzlu suya batırılır. 15 numara bir neşter ile cildin orta hattında bir kesi yapın ve kafatasının üzerindeki kasları yapın.
Kafatasını ortaya çıkarmak için cildi ve kası çekin. Bire dört yuvarlak matkap ucuyla, ön beyni ortaya çıkarmak için kafatası kapağını dikkatlice delin. Sonra kafatasını kesmek için rongeurs kullanın.
15 numara neşter ile beyinde ve koku soğancığında bir kesi yapın. Durayı kafatasından dikkatlice ayırmak için bir spatula kullanın. Ardından, trigeminal ganglionu ve kafatası tabanını görüntülemek için kopmuş beyni yavaşça kaldırın.
Herhangi bir kanamayı koter kalemi ile koterize edin. GCaMP6-X'i görüntülemek için, kafatası boşluğunu mikroskobun objektifinin altına yerleştirin. Ardından terminal ganglionu odağa getirin.
Ardından, yüzün bir santimetrekaresine mekanik uyaranlar uygulayın. Uyarana yanıt veren trigeminal ganglionun nöronlarını görselleştirmek için 20X'lik bir hedef kullanın. Floresan statoyu zaman içinde toplama yazılımıyla toplamak için, edinme menüsünün altındaki akış edinme düğmesine basın.
Ardından kare sayısını 300'e ve alım süresini 90 saniyeye ayarlayın. Kare hızında görüntü elde etmek için kamera parametrelerini ayarlayın. Üç dakika boyunca kararlı temel kayıtlar elde edin.
Daha büyük bir viral titre hacmi, sıçan yavrularının nöronal enfeksiyonunun artmasına neden oldu. Hafif mekanik stimülasyon, trigeminal ganglionun sadece V2 bölgesini aktive etti. İstirahat floresansı, çoğu nöronda nispeten düşüktü ve birkaç spontan artış vardı.
Doğal uyaranlar, özellikle noktasal stimülasyon, en sağlam nöronal tepkileri ortaya çıkardı. Kronik daralma yaralanması modellerinde fırça uyaranları, yaralıda kontralateral tarafa göre pik yanıtın büyüklüğünde iki kat artış ortaya çıkardı. İki uyaran seri olarak uygulandığında, ikinci uyarana yanıt olarak önemli bir amplifikasyon oldu.
