Hastanın üst endoskopisi sırasında toplanan mide biyopsilerinden tek hücrelerin izolasyonuna başlamak için önce dokunun 15 mililitrelik konik bir tüpün dibine yerleşmesine izin verin. Yerleştikten sonra, ortamı aspire etmek için bir pipet kullanın ve biyopsileri bir mililitre antibiyotik takviyeli PBS ile iki kez yıkayın. En az 20 miligram dokuyu, DTT ile takviye edilmiş bir mililitre PBS içeren 1.5 mililitrelik bir tüpe aktarın.
Dokuyu bir ila iki milimetre veya daha küçük parçalara ayırmak için ince diseksiyon makası kullanın. Tüpün altındaki doku parçalarını toplamak için 15 saniye boyunca bir masa üstü mini santrifüj kullanın, ardından mümkün olduğunca fazla süpernatan aspire edin. 50 mililitrelik konik bir tüpe beş mililitre taze ısıtılmış sindirim tamponu ekleyin.
Bu tüpten 500 mikrolitre tamponu doku parçalarını içeren 1.5 mililitrelik tüpe aktarın. Daha sonra, makas kullanarak, doku kaybını en aza indirmek için ucun çapını artırmak için alttan 1.000 mikrolitrelik pipet ucuna kesin. Şimdi, modifiye edilmiş pipet ucuyla, küçük doku parçalarını 1,5 mililitrelik tüpten 50 mililitrelik tüpteki sindirim tamponuna aktarın.
Sindirim tamponunu ve doku karışımını 200 RPM'de orbital çalkalama ile 37 derecede 30 dakika inkübe edin. Daha sonra, sindirim tamponundaki dokuya% 0.25 EDTA ile beş mililitre ısıtılmış tripsin ekleyin ve inkübe edin. Eşit hacimde gelişmiş DMEM / F-12 ortamı ekleyerek sindirim tamponunu ve tripsini nötralize edin ve süspansiyonu 70 mikronluk bir hücre süzgecinden geçirin.
