Hasta tarafından elde edilen gastrik organoidler paketlenmeye hazır hale geldikten sonra, organoidlerin rutin geçişine başlayın. İlk olarak, 24 oyuklu plakada yapılan bazal membran matrisine gömülü organoidleri içeren ortamı her bir kuyudan çıkarın. Ardından bir mililitre buz gibi gelişmiş DMEM F12 ortamını doğrudan bir bazal membran matris kubbesine dağıtın.
Kubbenin tüm parçaları plakadan ayrılana kadar ortamı aspire etmeye ve dağıtmaya devam edin. Daha sonra hem ortamı hem de parçalanmış bazal membran matrisini kuyudan bir sonraki kuyuya taşıyın ve paketleme için planlanan tüm kuyucuklar için işlemi tekrarlayın. Son bazal membran matris kubbesini söktükten sonra, ortamı ve karışımı 1,5 mililitrelik bir tüpe dağıtın.
1000 mikrolitrelik bir ucu bir P1000 pipetine takın ve ardından bu ucu 200 mikrolitrelik bir uca yerleştirin. Bu pipet kurulumunu kullanarak, organoidleri küçük parçalara ayırmak için organoid matris karışımını yaklaşık 25 kez kuvvetlice yukarı ve aşağı pipetleyin. Parçalanmış organoid karışımı, 2000 G'de 30 saniye boyunca dört santigrat derecede bir masa üstü santrifüj kullanarak santrifüjleyin.
Hesaplanan taze bazal membran matris hacmini tüpteki peletlenmiş organoidlere ekleyin. Karıştırmak için tüpün içeriğini yavaşça yukarı ve aşağı pipetleyin. Hızlı bir şekilde, 50 mikrolitre organoid matris karışımı, 24 oyuklu bir plakanın ayrı kuyucuklarına bölünür.
Plakayı hemen kapatın ve tek bir yumuşak hareketle plakayı ters çevirin. Bazal membran matrisinin polimerize olmasını sağlamak için ters çevrilmiş plakayı 35 dakika boyunca 37 santigrat derecelik bir doku kültürü inkübatörüne yerleştirin. Son olarak, her bir kuyucuğa 500 mikrolitre önceden ısıtılmış gastrik organoid media ekleyin.
Başlatmadan sonraki 20. günde, organoidler, büyük bir organoid boyutu veya karartılmış bir iç kısım ile gösterilen geçişe hazırdı. Bu noktaların ötesine geçmek için bırakılan organoidler, 2D tek katmanlara ayrılmaya başladı. Gastrik paketlendikten ve yeniden tohumlandıktan sonra, kubbeler, kendilerini çok hızlı bir şekilde çok daha fazla organoid halinde yeniden düzenleyen birçok organoid parçası içeriyordu.
