Antikor panelini analiz edin, sitometrenin kırmızı, sarı, mavi ve mor dahil olmak üzere en az dört lazere sahip olduğunu onaylayın. Kompanzasyon boncukları veya tek leke hücresi kontrolleri ile kompanzasyon matrisini oluşturun. Kalibre etmek ve standartlaştırmak için, boncuk tepe noktaları önceki deneylerdeki hedef değerlerle hizalanana kadar fotoçoğaltıcı tüp voltajını ayarlayarak her deneyin başında gökkuşağı floresan boncukları çalıştırın.
Deney için fotoçoğaltıcı tüp voltajını ve kazancını ayarlayın. Ardından, bir kompanzasyon matrisi oluşturmak için antikor yakalanan kompanzasyon boncuklarını kullanın. Ardından, bir nokta grafiğinde doğrusal olarak ileri dağılım yüksekliğine karşı kütükteki yan dağılım alanını çizin, enkazı kapatın ve S1 kapısını kullanarak hücre boyutunu seçin, bir nokta çiziminde tekli hücreleri seçin, S2 kapısı ile ileri dağılım yüksekliğine karşı ileri dağılım genişliğini seçin.
Dört kat kapıları oluşturmak için, her dört kat kanalı için ilgili FMO'yu kullanın. Tek parametreli histogramlar, her kanaldaki pozitif sinyali belirler ve buna göre kapıları oluşturur. Belirlenen geçit stratejisini kullanarak örnekleri dikkatlice kaydedin.
P2 RY 12 plus sinyalini kullanarak mikroglia'yı tanımlayın ve yalnızca mikroglia için ilgili kanaldaki protein ekspresyonunu belirleyin. Kayıt sırasında kullanılan aynı geçit stratejisini çoğaltarak sitometre analiz yazılımı kullanıcı arayüzünde analiz kapıları oluşturun. Telafi edilen kanal yüksekliğinde ilgilenilen popülasyonun medyanını seçmek için istatistik ekle işlevini kullanın.
Daha fazla istatistiksel analiz için tablo düzenleyiciyi kullanarak ilgili kanalların MFI değerlerini bir elektronik tabloya aktarın. Lipopolisakkarit tedavisi, histon üç lizin 27 asetilasyonunda bir artışa neden oldu. MFI cinsiyet içinde normalleştirildiğinde, boyanmış hücrelerin histogram analizi, hücre kaymalarının artmış floresansa sahip normal dağılımlı popülasyonlarını gösterdi.
Boyanmış hücrelerde histon üç lizin 27 asetilasyonunda benzer bir artış görüldü.
