Başlamak için, steril lamelleri altı oyuklu doku kültürü kaplarının oyuklarına yerleştirin ve lameli örtmek için oyuklara yeterli miktarda Poli-L-Lizin ve laminat çözeltisi dökün. Ardından, buharlaşmayı azaltmak için plakayı plastik sargı ile kapatın ve gece boyunca dört santigrat derecede inkübe edin. Ertesi sabah, lamelleri steril PBS ile üç kez yıkayın.
Lameli içeren her bir oyuğa 10.000 hücreyi plakaya iki mililitre hücre süspansiyonu ve büyüme ortamı ekleyin. Lamelleri PBS ile yıkadıktan sonra, hücreleri% 4 paraformaldehit çözeltisi ve PBS ile 18 dakika sabitleyin. Lameller immün boyamadan önce beş dakika boyunca PBS ile üç kez durulayın.
İmmün boyanmış ve yıkanmış lamelleri bir ila beş mikrogram Hoechst boyasında 10 dakika inkübe edin. Ardından lamelleri PBS ile beş dakika daha yıkayın. Slaytları eşit oranda PBS ve gliserol karışımı kullanarak monte edin ve görüntüleri bir floresan mikroskobu kullanarak yakalayın.
Hücrelere enzimatik olmayan bir hücre ayrışma solüsyonu ile 30 saniye ila bir dakika arasında muamele edin. Ardından, enzimatik olmayan hücre ayrışma reaktifinin her bir mililitresi için beş mililitre DMEM ekleyin. Bir hemositometre kullanarak hücreleri sayın.
Hücreleri 5G'de beş dakika santrifüjleyin. Hücreleri, 100 mikrolitre DMEM başına altıncı hücrelerin 10'unun bir ila iki katı konsantrasyonda yeniden süspanse edin. Hayvanı midesine yerleştirin ve enjeksiyon bölgesini% 70 etanol ile sterilize edin.
Altıncı hücrelerin 10'unu sağ kanatta deri altına bir ila iki kez enjekte edin. Fareyi tek başına yataksız bir kafese yerleştirin ve iyileşmesine izin verin. Hipotermiyi önlemek için, kafesin bir kısmını ısıtma yastığının üzerine yerleştirin.
Erken geçişli P0 GGF beta 3 MPNST hücrelerinin düşük ve yüksek güçlü görüntüleri gösterilmektedir. Hücrelerin tümörojenik olduğu, yumuşak agarda koloniler ve immün yetmezliği olan farelerde greftler oluşturduğu bulundu.
