Her numune için silindirik kalay folyolar oluşturarak gömme kalıpları hazırlayın. Kalıpları optimum kesme sıcaklığı veya OCT bileşiği ile doldurun. Ardından iki yalıtım varili hazırlayın.
Küçük namluyu izopentan ve büyük namluyu sıvı nitrojen ile doldurun. Kas diseksiyonundan 10 dakika önce küçük namluyu daha büyük olanın içine yerleştirin. Fareyi diseksiyon için hazırlayarak başlayın.
Masseter kasını ortaya çıkarmak için farenin yüzündeki cildi kesin. Masseter kasının arka kısmını tamamen ortaya çıkarmak için parotis bezlerini çıkarın. Masseter kasını ön bağlantısından mandibula üzerindeki arka bağlantısına kadar inceleyin.
Daha sonra kas dokusunu OCT'ye batırın ve bileşiğe dik tutun. Kalıbı bir iğne tutucu kullanarak önceden soğutulmuş izopentanın içine aktarın. OCT beyaz ve katı hale gelene kadar 40 saniye bekleyin.
Taze donmuş kas örneklerini etiketli 24 oyuklu plakalarda saklayın. Numuneleri hemen 20 santigrat derecede bölümlere ayırın veya uzun süreli kullanım için 80 santigrat derecede saklayın. Daha sonra, cildi ayak bileğinden dizine kadar kesin ve tibialis ön kasını ortaya çıkarmak için fasyayı çıkarın.
Tibialis anteriorunun tendonunu izole etmek için mikrodiseksiyon forsepslerinin ucunu kullanın ve tibiaya yapışan lifleri koparmak için dizinize kadar kaydırın. Ayak bileğindeki tendonu kesin. HE ve sirius kırmızı boyanması, donma yaralanması üzerine, tibialis ön kasının 14 gün sonra sağlam kontrole benzer bir morfoloji ile tam rejenerasyon gösterdiğini ortaya koydu.
Buna karşılık, masseter kası, 14 günlük donma yaralanmasından sonra bozulmuş miyofiber rejenerasyonu ve aşırı hücre dışı matris birikimi sergiledi. Yaralanmadan 14 gün sonra Pax7 için immünohistolojik boyama, yoğun nüfuslu çekirdekler gösterdi, ancak orantılı olarak artmış kas uydu hücreleri yoktu. Yaralanmadan 14 gün sonra tibialis anterior kasında çok sayıda merkezi yerleşimli miyofiber tespit edilirken, yaralanan bölgedeki masseter kasında miyoliflerin konturu zar zor fark edildi.
Bunun yerine, PDGFRalfa pozitif FAP'ların infiltrasyonu gözlendi.
