Başlamak için, anestezi uygulanmış fareleri cerrahi prosedür için hazırlayın. Cerrahi makas kullanarak, kafatasını ortaya çıkarmak için cildi başın traş edilmiş bölgesinin merkezi boyunca kesin. Ardından, kafatasını seyreltilmiş hidrojen peroksit kullanarak steril bir pamuklu çubukla bir ila üç saniye temizleyin ve kafatasını yeni bir steril pamuklu çubukla kurutun.
Kafatasını öne ve arkaya hizalamak için, bregma ve lambda'daki dorsal ventral derinliği ölçün. Başlangıç noktası olarak bgma'yı kullanarak, kortekste istediğiniz alanı bulun ve işaretleyin. Ardından, korteksi ortaya çıkarmak için bir trephine matkap ucu ve bir diş matkabı kullanın.
Eşit bir kraniotomi elde etmek ve hasarı önlemek için matkap ucunun açısının kafatasının eğriliğine dik olduğundan emin olun. Dirençte bir azalma hissedilene kadar delin ve ardından delme işlemini durdurun. 23 gauge iğne ucu kullanarak, ayrılan kemik parçasını dikkatlice çıkarın.
Şimdi, kalıntıları gidermek ve kanamayı durdurmak için açıkta kalan korteksi soğuk ACSF'ye batırılmış cerrahi köpükle temizleyin. Mikroprizmanın yerleştirilmesini kolaylaştırmak ve korteksteki basıncı hafifletmek için bir kesi yapın. Cerrahi bıçağı stereotaksik koldaki tutucuya takın ve bıçağı veya stereotaksik kolu medial lateral eksen boyunca kesmek için yönlendirin.
Şimdi, bıçağı istenen ön arka koordinata getirin. Ardından, bıçağı kraniotominin medial kenarına doğru hareket ettirin ve kemiğe değene kadar yavaşça indirin. Kafatası yüzeyinden önceden kesilmiş insizyonun derinliğini belirlemek için verilen denklemi kullanın.
Kesi uzunluğunun bir milimetreden büyük olduğundan emin olun. İdeal olarak, yaklaşık 1,2 milimetre olmalıdır. Bıçağı kraniotominin medial kenarından insizyonun başlangıç medial koordinatına doğru hareket ettirin ve bıçağı yavaşça kortekse indirin.
Durayı deldikten ve kortekse girdikten sonra, dokuyu yağlanmış ve nemli tutmak için bir damla soğuk ACSF uygulayın. Son derinliğe ulaşıldığında, bıçağı medial lateral eksen boyunca hareket ettirin. Doku bıçakla sürüklenirse, dokunun kesildiğinden emin olmak için bıçağı birkaç kez yukarı ve aşağı hareket ettirin.
Ardından, bıçağı son derinliğine geri döndürürken yanal olarak hareket etmeye devam edin. Tamamlandığında, bıçağı yavaşça kaldırın. Kan görülürse, kanı seyreltmek ve çıkarmak için kesi bölgesini ACSF'ye batırılmış cerrahi köpükle temizleyin.
Mikroprizmayı yerleştirmeye hazır olana kadar açıkta kalan korteksin üzerine doymuş bir köpük yerleştirin. Mikroprizmayı implant kitine takın. Prizmanın görüntüleme tarafının taban plakası vidasının karşısında olduğundan emin olun.
Mikroprizmayı stereotaksik çerçeveye takın ve insizyonla hizalanacak şekilde yönlendirin. Mikroprizmayı yavaşça insizyon bölgesine indirin. Başlangıçta ACSF'yi çıkarın, ancak prizma kortekse girdikten sonra soğuk ACSF ile yıkayın.
Gerekirse, ekstra ACSF ekleyin ve prizmayı yukarı ve aşağı hareket ettirerek korteksi çalkalayın. Açıkta kalan kortikal alanı ve lensi, çevredeki kafatası ve kukla dürbün üzerindeki fazla yapışkanı en aza indiren koruyucu bir silikon yapıştırıcı tabakası ile örtün. Şimdi, çimento uygulamasında implantın uygun şekilde yerleştirilmesi için kafa plakasını arkaya doğru konumlandırın.
Kafa plakasının orta hattını, kafa sabitleme deneyleri sırasında her iki tarafın da sabitlenebilmesini sağlamak için önerilen kraniotominin sağına hafifçe hizalayın. Ardından, yapışkan diş çimentosu hazırlamak için bir kepçe opak çimento tozunu dört damla karıştırma ortamı ve bir damla katalizör ile karıştırın. Kafa plakasına ve kafatasına çimento uygulayın ve çimento sertleşene kadar baş plakasını yerinde tutun.
Açıkta kalan kafatasını ve dokuyu kaplamak için yapışkan çimento uygulayın, mikroprizmayı ve kafa plakasını stabil olana kadar birleştirin. Kukla mikroskobu ayırmak için mikroprizmayı forseps ile stabilize ederken stereotaksik kolu yukarı doğru hareket ettirin. Koruyucu kapağı lensin üzerine yerleştirin ve vidayı sıkarak sabitleyin.
Karanlıkta açık bir arenayı keşfeden hayvanların nöronları, üç hafta arayla yapılan seanslarda karşılaştırılabilir seviyelerde floresan ve ateşleme oranları gösterdi.
