Başlamak için önceden hazırlanmış formül ve sabit ve parafine gömülü akciğer kanseri dokusu örneği slaytı edinin. Beş dakika boyunca 65 santigrat derecede inkübe edin. Slaytı ksilene batırarak dehidrasyon gerçekleştirin, ardından azalan konsantrasyonlarda etanol çözeltileri ekleyin.
Ardından slaytları her biri bir dakika boyunca üç kez sterilize edilmiş suya batırın. Antijen alımı için slaytı bir boyama ve onarım kutusuna yerleştirin. pH altı veya dokuzluk immünohistokimyasal antijen onarım tamponu çalışma çözeltisi ile doldurun.
Kutuyu bir kapakla kapatın ve mikrodalga fırında sekiz dakika boyunca %100 güçte ısıtın. Ardından slaydı oda sıcaklığına soğutun. Dokuyu bloke edici bir çözelti ile örtün ve ardından nemlendirilmiş bir odada oda sıcaklığında 10 dakika inkübe edin.
Bloke edici çözeltiyi çıkardıktan sonra, slaytı birincil antikor çalışma çözeltisi ile örtün ve nemlendirilmiş bir odaya yerleştirin. Daha sonra bu odayı 37 santigrat derecede bir saat inkübe edin. Ardından, slaydı iki dakika boyunca yıkama tamponu çalışma solüsyonuyla yıkayın.
Polimer yaban turpu peroksidazı doğrudan slaydın üzerine damla damla ekleyin ve oda sıcaklığında 15 dakika inkübe edin. Slaytı yıkadıktan sonra, florofor çalışma solüsyonunu doğrudan slayt üzerine damla damla ekleyin ve oda sıcaklığında 10 dakika inkübe edin. Slayt yıkandıktan sonra, daha önce gösterildiği gibi mikrodalga işlemi uygulayın.
Slayt oda sıcaklığına soğutulduğunda, her biri bir dakika boyunca çift damıtılmış suyla üç kez yıkayın. Ardından, slaydı iki dakika boyunca yıkama tamponu çalışma solüsyonuna batırın ve gösterildiği gibi antikor inkübasyonu, yaban turpu peroksidaz ve florofor ilavesi gerçekleştirin. Hücre nükleer boyama için, slaytı DAPI çalışma solüsyonu ile örtün ve nemlendirilmiş bir odada oda sıcaklığında beş dakika inkübe edin.
Daha sonra slaytları her biri bir dakika olmak üzere üç kez çift damıtılmış suyla yıkayın. Slayttan su damlacıklarını çıkarın. Slayta 10 ila 20 mikrolitre anti-floresan söndürücü ekleyin ve bir mikroskop kapak camı ile kapatın.