Bir T75 şişesinde ısıyla etkisiz hale getirilmiş FBS, Penisilin ve Streptomisin içeren HEK293T hücrelerini ve DMEM'i koruyarak başlayın. Hücre sayımı için 20 mikrolitre hücre süspansiyonunu 20 mikrolitre tripan mavisi çözeltisi ile karıştırın. Hücre sayma odasına 20 mikrolitre boya karışımlı hücre süspansiyonu ekleyin ve mililitre başına hücre sayısını sayın.
Tohum HEK293T hücreleri ve 10 mililitre tam DMEM'i 10 santimetrelik bir hücre kültürü Petri kabında tohumlayın. Hücreleri gece boyunca 37 santigrat derecede bir karbondioksit inkübatörde inkübe edin. Ertesi gün, tüm ortamı çıkarın ve dokuz mililitre DMEM serumsuz ortam ile değiştirin.
Verilen viral partikül grubu bileşiklerini kullanarak, bir kotransfeksiyon karışımı hazırlayın. Karışımı yavaşça Petri kabına ekleyin ve altı saat boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. İnkübasyondan sonra, serumsuz DMEM'i tam bir DMEM ortamı ile değiştirin ve 48 saate kadar kotransfeksiyon için inkübasyona devam edin.
Ardından, tek tabakanın yüzeyine tekrar tekrar pipetleyerek hücreleri ayırın ve süspansiyonu 15 mililitrelik bir tüpe aktarın. Hücre süspansiyonunu 400G'de beş dakika santrifüjleyin. Süpernatanı toplayın ve 0.22 mikronluk bir filtreden geçirin.
Ha-CoV-2 psödovirüsü içeren süzüntüyü 80 santigrat derecede saklayın.
