Bir T75 şişesinde ısıtılmış aktive edilmiş FBS, penisilin ve streptomisin içeren DMEM'de HEK-293T ACE2 TMPRSS2 hücrelerini koruyarak başlayın. Hücre sayımı için 20 mikrolitre hücre süspansiyonunu 20 mikrolitre Tripan Blue çözeltisi ile karıştırın. Hücre sayma odasına 20 mikrolitre boya karışımlı hücre süspansiyonu ekleyin ve mililitre başına hücre sayısını sayın.
96 oyuklu bir plakanın her bir oyuğuna 50 mikrolitre tam DMEM ortamında dört HEK-293T ACE2 TMPRSS2 hücresinin gücüne 2,5 kez 10 kez tohumlayın. Hücreleri bir karbondioksit inkübatörde gece boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Ertesi gün, 50 mikrolitre DMEM'i 50 mikrolitre virüs süspansiyonu ile değiştirin ve 37 santigrat derecede 18 saat inkübe edin.
İnkübasyondan sonra, her bir oyuğa 7.5 mikrolitre hücre lizis tamponu ekleyin ve iki dakika boyunca bir orbital çalkalayıcı üzerinde karıştırın. Hücreler parçalandıktan sonra, taze hazırlanmış ateşböceği lusiferaz tahlil solüsyonunu ekleyin ve bir dakika boyunca bir orbital çalkalayıcı üzerinde karıştırın. Ticari bir lusiferaz mikroplaka okuyucu kullanarak lusiferaz aktivitesini analiz edin.
Nötralize edici antikor tahlili için, daha önce gösterildiği gibi 50 mikrolitre tam DMEM'de HEK-293T hücrelerini tohumlayın. 96 oyuklu bir plakada, sekiz mikrolitre 27 BV nötralize edici antikor ekleyin ve altı mikrolitre serumsuz DMEM ile seri seyreltmeler gerçekleştirin. Seri olarak seyreltilmiş antikora 54 mikrolitre Ha-CoV-2 virüs partikülü ekleyin ve süspansiyonu karıştırın.
% 5 karbondioksit içinde 37 santigrat derecede bir saat inkübe edin. Daha sonra HEK-293T hücrelerini içeren kuyucuklara 50 mikrolitre virüs süspansiyonu ekleyin. Kontroller için, sadece HEK-293T hücrelerini içeren kuyucuklara 50 mikrolitre tam DMEM ortamı ekleyin.
Plakayı 18 saat boyunca 37 santigrat derecede bir inkübatöre yerleştirin. Hücreleri daha önce gösterildiği gibi parçaladıktan sonra, taze hazırlanmış ateşböceği lusiferaz tahlil solüsyonunu ekleyin ve bir dakika boyunca yörüngesel çalkalayarak karıştırın. Ticari bir lusiferaz mikroplaka okuyucu kullanarak lusiferaz aktivitesini analiz edin.
Ha-CoV-2 Omicron ve Omicron varyantları, Wild tipi Ha-CoV-2'den dört ila on kat daha yüksek sinyal üreterek daha yüksek bulaşıcılığa işaret ediyor. Antikor 27 BV, hem Delta hem de Omicron varyantlarına karşı nötralize edici aktivite gösterdi. Omicron için 27 BV'nin ID50'si, Vahşi tip ve Delta için ID50'den yaklaşık 10 kat daha az güçlüydü.
