Başlamak için, yüzeyi sterilize edilmiş Arabidopsis thaliana Col-0 tohumlarını tohum çimlenme ortamı içeren bir tabağa yerleştirin. İki günlük soğuk tabakalaşmadan sonra, plakayı uzun bir gün fotoperiyodu ve% 50 nem ile 21 santigrat dereceye ayarlanmış bir yetiştirme odasına taşıyın. Bir haftalık fideleri, bitki yetiştirme ortamı olan bir bitki kültürü kutusuna aktarın.
Agrobacterium tumefaciens kültürünü, 600 nanometrede 0.9 ila 1'lik bir optik yoğunluğa ulaşana kadar LB ortamında büyütün. Bir insülin şırıngasına monte edilmiş bir iğne kullanarak, bir aylık Arabidopsis bitkiciğin birincil çiçeklenme sapının tabanına yaklaşık 50 mikrolitre bakteri kültürü enjekte edin. Birincil sapın yüzeyindeki dokuyu şırınga ile çizin.
İki ila dört hafta sonra, ortaya çıkan tüylü kökleri çıkarın ve zirai bakteri üremesini baskılamak için antibiyotiklerle desteklenmiş tüylü kök büyüme ortamı ile bir Petri kabında yetiştirin. Tüylü kökü karanlıkta 24 santigrat derecede kültürleyin. Bir ila iki hafta sonra, plakadaki tüylü kökleri tüylü kök büyüme ortamı ile bireyselleştirin ve seçilen tüylü kök çizgilerini her dört ila beş haftada bir taze bir ortama aktarın.
Kıllı kökleri, kallus oluşumunu indüklemek için rejenerasyon ortamı olan bir plakaya aktarın ve uzun bir gün fotoperiyodunda 21 santigrat derecede kültürleyin. Sürgünler nasırdan çıktıktan sonra, sürgünleri kesin ve büyümeyi ve uzamayı teşvik etmek için iki ila üç hafta boyunca bir sürgün uzama ortamına aktarın. Daha sonra uzatılmış sürgünleri kök indüksiyon ortamına aktarın.
Son olarak, transgenik seçimi gerçekleştirmek için köklü bitkiyi toprağa aktarın. A.thaliana'da, test edilen tüm tüylü kök hatlarında 14 gün içinde sarı calli indüklendi. Koyu yeşil lekeler olarak görülebilen ilk sürgün primordia, rejenerasyon ortamına aktarıldıktan sonraki üç hafta içinde ortaya çıktı.
Dört hafta sonra, sürgünler çizgilerin% 90'ında tüylü kökleri kapladı ve bazı durumlarda maceracı kök oluşumu gösterdi. Ancak, bir hat üç ay sonra bile yenilenmedi. Yabani tiple karşılaştırıldığında, A.thaliana'nın tüylü kök rejenerantları, yoğun kök sistemleri, buruşuk yapraklar ve değişen çiçeklenme zamanı ile cüce bir fenotip sergiledi.
