CLEM için Navigasyon Haritasının Oluşturulması ve Elektron Mikroskobu için Ultra İnce Kesitlerin Hazırlanması

Lütfen tüm çevirilerin yapay zeka tarafından oluşturulduğunu unutmayın. İngilizce sürüm için buraya tıklayın.

46 Views

•

02:38 min

•

January 12th, 2024

DOI :

10.3791/201226-v

January 12th, 2024

•

Shuyuan Wang*¹, Haiyan Xiong*¹^,², Qiyuan Chang*¹^,³, Xudong Zhuang*⁴^,⁵^,⁶, Yaochen Wu¹^,³, Xinrui Wang⁴^,⁵^,⁶, Congxian Wu¹, Zhifei Fu¹^,⁷^,⁸

¹Public Technology Service Center, Fujian Medical University, ²The School of Pharmacy, Fujian Medical University, ³The School of Basic Medical Sciences, Fujian Medical University, ⁴College of Clinical Medicine for Obstetrics & Gynecology and Pediatrics, Fujian Medical University, ⁵Medical Research Center, Fujian Maternity and Child Health Hospital, ⁶NHC Key Laboratory of Technical Evaluation of Fertility Regulation for Non-human Primate, Fujian Maternity and Child Health Hospital, ⁷Institute of Neuroscience, Fujian Medical University, ⁸Fujian Key Laboratory of Molecular Neurology, Fujian Medical University

* Bu yazarlar eşit katkıda bulunmuştur

Transkript

Başlamak için, mScarlet'i ifade eden fare beyin dokusunun ultra ince bir bölümünü alın. Kapak camındaki ultra ince bölüme 10 mikrolitre montaj tamponu ekleyin ve montaj tamponuna yeni bir temiz kapak camı yerleştirin. Ultra ince kesitli iki kapak camını bir görüntüleme odasına koyun.

Ters çevrilmiş bir floresan mikroskobunun parlak alan görüntüleme modunda halka işaretleyiciyi kullanarak kesiti bulun ve kesitin bir köşesine gidin. Beyaz ışığı açın ve parlak alan görüntüsünü yakalayın. Ardından beyaz ışığı kapatın.

Lazeri etkinleştirin ve aynı görüş alanının floresan görüntülerini yakalayın. Lazeri devre dışı bırakın ve %10 örtüşme ile bitişik görüş alanına geçin. İkinci görüş alanının hem parlak alanını hem de floresan görüntüsünü yakalayın ve görüş alanını birleştirmek için görüntüleme yolunu kaydedin.

Şimdi ilgilendiğiniz hücreleri hedeflemek için navigasyon haritasını kullanın. Lazeri etkinleştirin ve ilgilenilen hücrenin 300 kare floresan görüntüsünü yakalayın. Ardından, lazeri devre dışı bırakın.

Daha sonra beyaz ışığı etkinleştirin ve yaklaşık 100 ardışık parlak alan görüntüsü çekin. Elektron mikroskobu için bölümleri hazırlamak için, bir cam kavanozu çift damıtılmış suyla doldurun. Ultra ince bölümleri tutan kapak gözlüklerini görüntüleme odasından çıkarın ve cımbızla ayırın.

Kapak camını bölümle sıkıştırın. Montaj tamponunu çift damıtılmış suyla yıkayın ve kurumasını bekleyin. Tek taraflı bir bıçak kullanarak, ultra ince bölümün etrafında bir hash elde edin.

Skorun her köşesine 10 mikrolitre% 12 hidroflorik asit bırakın. Kapak camını yavaşça suya yerleştirin. Ardından Pioloform filmi ve ultra ince bölümü su yüzeyinde yüzdürün.

Izgara merkezinde yakalamak için bölüme kaplanmamış bir yuva ızgarası yerleştirin. Bir cam slaytı paraform ile örtün. Izgarayı Pioloform filmle alın ve oda sıcaklığında kurumaya bırakın.

Daha Fazla Video Keşfet