Başlamak için, zebra balığı embriyosunu toplayın ve 28.5 santigrat derecede bir inkübatörde döllenmeden 72 saat sonrasına kadar büyütün. Eş zamanlı olarak test edilecek kimyasalları istenen konsantrasyonda hazırlayın. Döllenme sonrası 72 saatlik embriyoları inceleyin.
Ölü veya yumurtadan çıkmamış embriyoları çıkarın. Her altı santimetrelik doku kültürü kabına dokuz mililitre E3 ortamı ile 10 embriyo yerleştirin. Bunlara pozlama plakaları denir.
Her bir pozlama plakasını bileşik ad, maruz kalma konsantrasyonu ve çoğaltma numarası ile etiketleyin. En düşük konsantrasyondan başlayarak her plakaya bir mililitre maruz kalma solüsyonu ekleyin ve plakayı hafifçe döndürün. Düşük çözünürlüğe sahip bileşikler için, ortamın 10 mililitresinin tamamını maruz kalma çözeltisiyle değiştirin.
Bileşik çözeltilerin embriyolara eklendiği sırayı kaydedin, daha sonra plakaları nemlendirilmiş odadaki bir inkübatör içinde 48 saat boyunca 28.5 santigrat derecede inkübe edin. Titreşim irkilme tahlilini başlatmak için bilgisayarı ve titreşim cihazını açın. Yapılandırma dosyası için bir e-tablo oluşturun.
Bileşik, konsantrasyon ve çoğaltmayı belirten beş plaka konumunun her biri için maruz kalma bilgilerini ekleyin. Titreşim irkilme test kiti için genel kullanıcı arayüzünü veya GUI programını açın. Kamera hareketini kontrol etmek ve kameranın tepkisini gözlemlemek için GUI programında farklı konumlar seçin.
Numune plakasını inkübatörden çıkarın. Onları belirlenen beş pozisyona yerleştirin ve embriyoların birkaç dakika oturmasına izin verin. GUI programında, kaydet'e tıklayın ve yeni pencere görünecektir.
Bu pencerede, daha önce hazırlanmış yapılandırma dosyasını seçin. Numune açıklamasının her konumdaki numunelerle eşleştiğini doğrulayın. Program tarafından ses darbesi etkinleştirildiğinde LED'in yandığını gözlemleyin.
Kayıttan sonra kamera birinci konumuna dönecek ve yazılım dosyaları sıkıştırmaya başlayacaktır. Ölçülen numuneleri bir sonraki setle değiştirin ve gösterildiği gibi bir sonraki çalıştırmaya devam edin. Ardından, embriyoları aynı anda tutmak için bir elek kullanarak tüm ölçülen plakalardan maruz kalma solüsyonlarını toplayın.
Veri analizini başlatmak için video verilerini sanal dublaj veya başka bir görüntüleme yazılımıyla açın. Ses nabzına yanıt veren embriyo sayısını görsel olarak puanlayın. Bileşik adını, kopyayı, bileşiğin konsantrasyonunu ve hareketli embriyoların yüzdesini elektronik tabloya kaydedin.
Katıştırılmış R komut dosyalarına sahip bir KNIME iş akışı kullanarak kıyaslama konsantrasyon analizini gerçekleştirin. Tedavi edilmemiş vahşi tip embriyolarda hareketsizliğin değerlendirilmesi, titreşim uyaranına maruz kaldığında farklı kavramalar arasında farklılıklarla birlikte ortalama %14.33'lük bir hareketsizlik gösterdi. Trikainin motilite üzerindeki etkileri için kıyaslama konsantrasyon hesaplamaları,% 1 konsantrasyonda motilitede bir azalma gösterdi,% 2.5'in üzerinde aktiviteyi durdurdu,% 50 / 164.9 mikromolar kıyaslama konsantrasyonu ile.
Optimal olmayan bir tahlil örneği, embriyo tepkilerinde tutarsızlıklar gösterdi ve bu da irkilme tepkisinin sağlamlığını etkileyen gelişimsel sorunları ima etti.
