Başlamak için, H9 embriyonik kök hücrelerinden beyin organoidleri elde edin ve yeni döllenmiş tavuk yumurtaları elde edin. İlk gün yumurta kabuğu yüzeyini %70 etanol ile temizleyin ve kurumasını bekleyin. Yumurtanın üzerine cerrahi kağıt yapışkan bir bandaj yerleştirin.
Bir lamba kullanarak, üst uçtaki en ince yumurta kabuğu yüzeyini deterinize edin. Daha sonra steril bir iğne ile, civciv kamını rahatsız etmeden hava odası deliği oluşturmak için yumurta kabuğunu hafifçe delin. Embriyoyu dış ortamdan korumak için hava haznesi deliğini yeni bir bandajla kapatın ve yumurtayı 38 santigrat derecede inkübe edin.
Yedinci günde, bandajı çıkarın ve yumurta kabuğu yüzeyini% 70 etanol ile silin. Ardından uzantıyı kaplayan yeni, daha büyük bir bandaj yerleştirin. Deliği iki santimetre çapında bir aşılama penceresine genişletmek için yumurta kabuğunu hafifçe delin.
Cımbız kullanarak yumurta kabuğu penceresinin kenarlarını çıkarın ve kalan tozu ve yumurta kabuğu parçalarını çıkarmak için bandajı soyun. Steril geniş bir gösterge ucu kullanarak, organoidi 50 mikrolitre PBS'de toplayın ve embriyonun bulunduğu yerin karşısındaki kam tarafına dikkatlice aktarın. Organoidin etrafına yedi mikrolitrelik bir kibrit jeli damlası ekleyin.
Pencereyi parafilm kullanarak kapatın ve yapışkan bir bandajla kabuğa tutturun. Kam farklılaşması için nakli inkübe edin. Beş gün sonra yapışkan bandajı çıkarın.
Makas ve ince cımbız kullanarak, numune alımını kolaylaştırmak için pencereyi büyütün. İki dakika boyunca% 4 paraformaldehit ile sabitleyin ve organoidi içeren kamın 1,5 santimetre karelik bir bölümünü toplayın. Başarılı greftlemeyi doğrulamak için, organoid ile 20 mikrometre kalınlığındaki cam doku dilimlerinin hematoksilin ve eozin boyamasını gerçekleştirin.
Greft dokusunun hematoksilin ve eozin boyaması, organoidlerin kan damarlarının infiltrasyonuna dair herhangi bir kanıt olmaksızın kam damarlarının yanında olgunlaşmaya devam ettiğini gösterdi.