Kanser Dokusu Kesitlerinin Multipleks Siklik Floresan İmmünohistokimyasal Boyanması

Başlamak için, kanser dokusu kesitlerini içeren önceden hazırlanmış slaytlar edinin. Primer antikorların çalışma karışımını hazırlayın. Antikor kompleksini slayt bölümüne ekleyin ve oda sıcaklığında bir saat inkübe edin.

Ardından slaytı beş dakika boyunca %0,1 Tween PBS ile üç kez yıkayın. Floresan sekonder antikor karışımı hazırlayın. Slaytın üzerine damla damla ekleyin ve oda sıcaklığında bir saat inkübe edin.

Daha sonra bir saat boyunca oda sıcaklığında ikinci bir primer antikor inkübasyonu turu gerçekleştirin. Slaytı her biri beş dakika boyunca %0.1 Tween PBS ile üç kez yıkayın. Ve bir filtre kağıdı kullanarak, dokunun çevresindeki fazla suyu alın.

Benzer şekilde, ikinci bir ikincil antikor inkübasyonu turu gerçekleştirin ve daha önce gösterildiği gibi yıkayın. Şimdi, dokuya potasyum permanganat reaktifi ekleyin. Bir dakika sonra, beş dakika boyunca akan su ile durulayın.

Artan alkol konsantrasyonları ile dehidrasyon gerçekleştirin. Son olarak, doku bölümünü tamamen kaplamak için bir DAPI ekleyin ve multispektral görüntüleme için bir kapak fişi yerleştirin. Multipleks immünofloresan görüntülemede akciğer kanseri beyin metastazı dokusunda CD üç pozitif, CD sekiz pozitif, CD 20 pozitif hücrelerin varlığı saptandı.