Başlamak için görüntüleme yazılımını açın. Al penceresini açın. Pozlama süresini 500 milisaniyeye, kamera alanını tam çipe ve gruplamayı bire ayarlayın, ardından gerekli kanal için aydınlatmayı ayarlayın.
Sitoplazmik karıştırma için, oosit nükleolüne odaklanmak için iletilen ışığı kullanın. Nükleer benek deneyleri için SRSF2 GFP damlacıklarına odaklanın. Çekim hızını optimize etmek için, Özel sekmesinde, kamera deklanşörünü pozlama için açık olacak ve ön sekansı temizlemek için net modu ayarlayın.
Ardından, Akış Alma penceresini açın. Al sekmesinde, RAM'e akış yapmak için alım modunu ve kare sayısını 480 olarak ayarlayın. Kare hızında görüntü elde etmek için kamera parametrelerini ve sıfıra atlanacak kare sayısını ayarlayın.
Dijital Fotoğraf Makinesi Denetleyicisi Parametreleri sekmesinde, fotoğraf makinesi durumunu durdur olarak, deklanşör modunu hiçbir zaman açmayacak şekilde, temizle modunu ön sırayı temizle olarak ve kare sayısını ortalama olarak bir olarak ayarlayın. Ardından, nesnenin etrafındaki ilgi alanını ayarlayın. Akış Edinme penceresinde, filmi başlatmak için Al'a tıklayın.
Aldıktan sonra, filmi bir tiff dosyası olarak kaydedin. Görüntü analizi için ImageJ veya Fiji'yi açın. Eklentilerde CIRB'ye tıklayın ve Verlhac menüsünü açın, ardından Oocyte Nucleus Shape'i seçin.
İletişim kutusunda, analiz edilecek filmleri içeren klasörü seçin. Ardından kırpma için teta açısını ve kenar boşluklarını seçin. Şimdi, XY kalibrasyonunu ve zaman aralığını seçin, ardından elektronik tabloda, tanımlanan her teta açısı için tüm T zaman noktaları üzerinden ortalama yarıçap R'yi hesaplayın, zaman içindeki ortalama şekli çizmek OK.To tıklayın.
Her T ve teta için, zaman içindeki ortalama yarıçap R'yi yarıçap küçük harf r'den çıkarın. Son olarak, tüm zaman noktaları T ve tüm açılar teta için dalgalanmaların ortalamasını hesaplayın her çekirdek ve tüm çekirdekler için tek bir koşuldan. Kontrol oositlerinde, çekirdek, nükleer prob YFP Rango ile görselleştirildiği gibi önemli periferik dalgalanmalar sergiledi.
Buna karşılık, hücre iskeleti kuvvetleri bozulmuş oositlerdeki çekirdek zamanla sabit kaldı. Çekirdek merkezinden çevresine olan mesafenin varyansı, bozulmuş hücre iskeleti kuvvetlerine sahip olanlara kıyasla kontrol oositlerinde altı kat artış olduğunu ortaya koydu. Kontrol oositlerindeki nükleer benekler, bozulmuş sitoplazmik kuvvetlere kıyasla damlacık yüzeylerinde daha fazla dalgalanma gösterdi.
