Canlı Trypanosoma brucei'de pHluorin2 Floresansını Ölçmek için Akış Sitometrisi için Numune Hazırlama

Başlamak için, pHluorin eksprese eden Trypanosoma brucei hücrelerini alın. Tetrasiklin veya doksisiklin ekleyin ve pHluorin ekspresyonunu indüklemek için gece boyunca inkübe edin. Daha sonra her kültürün üç mililitresini ayrı 15 mililitrelik tüplere aktarın.

Daha sonra hücreleri oda sıcaklığında 1000 xg'de 10 dakika santrifüjleyin. Süpernatanı çıkarın ve hücreleri bir mililitre PBS'de yeniden süspanse edin. Hücreleri dördüncü kez santrifüjledikten sonra, süpernatanı çıkarın ve hücre peletini PBS'de değişen konsantrasyonlarda glikoz ile yeniden süspanse edin.

Ölü hücreleri canlı hücrelerden ayırt etmek için propidyum iyodür veya Tiazol Kırmızısı ekleyin. Daha sonra her numuneyi akış sitometresi ile uyumlu beş mililitrelik tüplere aktarın.