Başlamak için akış sitometresi yazılımını başlatın. Yeni bir deneme açın. İstediğiniz sayıda örnek ekleyin ve adlandırın.
Ardından bir YL2-H veya RL1-H kanal histogramı, bir ileri dağılım alanına karşı yan saçılma alanı nokta grafiği, bir ileri dağılım alanına karşı ileri dağılım yüksekliği nokta grafiği ve bir BL1-H'ye karşı VL2-H kanal nokta grafiği ayarlayın. Boyanmamış vahşi tip Trypanosoma brucei kontrol hücrelerini numune enjeksiyon portuna yerleştirin ve s'yi ayarlayıntage konum. Dosya boyutunu küçültmek için, kaydedilmesi amaçlanmayan kanalların işaretini kaldırın.
Ayarlamalara izin vermek için düşük bir akış hızında başlayın. Ardından veri toplamaya başlamak için Çalıştır'a tıklayın. Ana tepe noktasını 2 ila üçüncü ila 10 ila dördüncü bağıl floresan yoğunluğu birimleri arasında hizalamak için YL1 veya RL10 voltajına ince ayar yapın.
Olayların %90'ından fazlasının nokta grafiği aralığında olduğundan emin olmak için ileri saçılma ve yan saçılma voltajlarını ayarlayın. Canlı hücreleri atlamadan enkazı hariç tutmak için ileri saçılma eşiğini ayarlayın. Boyanmamış vahşi tip kontrolün birincil tepe noktasını 10 ila iki ila 10 ila dördüncü bağıl floresan yoğunluğu birimleri arasında konumlandırmak için VL 2 ve BL 1 kanal ayarlarını değiştirin.
Kaydet'e tıklayın ve en az 10.000 olayı ölçün. Ardından, propidyum iyodür veya tiazol kırmızısı ile boyanmış ilk indüklenmiş pHluorin eksprese eden Tripanosoma numunesini numune enjeksiyon portuna yerleştirin. Yine, durulamayı gerçekleştirdikten sonra düşük akış hızında veri toplamaya başlayın.
Olayların %90'ından fazlasının doğru şekilde yakalandığından ve VL2-H ve BL1-H kanallarının doygun olmadığından emin olmak için her grafiği izleyin. Her numunedeki verileri FCS dosya formatında kaydedin ve analize hazırlanın.
