Başlamak için 44 mililitre bazal ortamı 50 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarın. Ortama 5 mililitre% 10 FBS ekleyin. Daha sonra penisilin streptomisin ve amfoterisin B antibiyotik solüsyonlarının her birini 0,5 mililitre pipetleyin.
Hızlı Dexstran çözeltisi içeren bir şişeyi 1000G'de 20 santigrat derecede 30 saniye santrifüjleyin. Litre başına 30 milimollük bir nihai konsantrasyon elde etmek için şişeye 175 mikrolitre su ekleyin. Malzeme tamamen eriyene kadar tüpü orta hızda 30 saniye vorteksleyin.
Çözünmüş materyali buz üzerinde beş dakika inkübe edin. İçeriğini tekrar girdaplamadan önce tüpü santrifüjleyin. Ardından tüpü daha fazla kullanana kadar buzun üzerine yerleştirin.
Ardından, malzemeyi konsantre etmek için çapraz bağlayıcıyı santrifüjleyin. Tiyol gruplarının litresi başına 20 milimollük bir nihai konsantrasyon elde etmek için çapraz bağlayıcı şişesine 188 mikrolitre su pipetleyin. Tüm malzeme çözülene kadar çapraz bağlayıcı çözeltisini girdaplayın.
İnkübasyondan sonra tüpü santrifüjleyin. Ardından, daha fazla kullanılana kadar oda sıcaklığına yerleştirmeden önce kısa bir süre girdaplayın. Daha sonra, bir ana karışım oluşturmak için tabloda verildiği gibi 10 mikrolitre hidrojel için yağ türevli kök hücre süspansiyonunu hazırlayın.
Ana karışımın dokuz mikrolitresini 96 oyuklu bir şerit plakasında bir kuyuya aktarın. Üç dakika sonra, jeli katılaştırmak için karışıma bir mikrolitre parçalanabilir çapraz bağlayıcı ekleyin. Pipet. Hidrojeller üzerinde 170 mikrolitre önceden ısıtılmış tam kültür ortamı.
İnkübasyondan sonra kültür ortamını değiştirin.
