Başlamak için, Candida Glabrata Culture ve YPD ortamını çalışan bir platforma yerleştirin. Maya Hücresi Süspansiyonunun optik yoğunluğunu 600 nanometrede YPD ortamı ile 0,65'e ayarlayın. Bir mililitre Maya Süspansiyonunu 111 mikrolitre %2 Gül Bengal ile yuvarlak kapaklı bir tüpte karıştırın.
Karışımı 25 santigrat derecede 15 dakika inkübe edin, 155 RPM'de 45 derecelik bir açıyla döndürün. İnkübasyondan sonra, karışımı 1.5 mililitrelik bir tüpe aktarın ve 2.5 dakika boyunca 16.100 G'de santrifüjleyin. Süpernatanı atın ve peleti yeniden süspanse etmek için tüpü beş kez hafifçe kazıyın.
Tüm Rose Bengal'i çıkarmak için süspansiyonu PBS ile dört kez yıkayın. Son yıkamadan sonra, 200 mikrolitre Rose Bengal yüklü Maya Süspansiyonunu 96 oyuklu bir plakadaki üç kuyucuğun her birine aktarın. Plakayı, aşağıdan yeşil ışık parlayan LED ampullerle Fotodinamik Işık Sisteminin üzerine yerleştirin.
İki dakika boyunca santimetre kare başına 4.38 joule Fotodinamik Terapi Dozunu vermek için LED ışık sistemini etkinleştirin. Işınlamadan sonra, 180 mikrolitre PBS içeren bir kuyucuğa 20 mikrolitre Maya Süspansiyonu ekleyin ve on kat seyreltme oluşturun. Her seyreltme faktörü için, YPD burgu plakaları üzerinde kadran başına 20 mikrolitre plaka.
Plakayı ters çevirin ve gece boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Ertesi gün, her kadrandaki koloni sayısını sayın. Verilen formülü kullanarak, mililitre başına koloni oluşturan birimleri hesaplayın.
Her koloninin merkezine doğrudan 20 mikrolitre% 20 Trifenil tetrazolyum klorür ekleyin ve 37 santigrat derecede 30 ila 40 dakika inkübe edin. 48 bit tam renkli optik tarayıcı kullanarak plakaları 1.200 DPI'da tarayın. Gecikme Büyüme Aşamasında TZero Maya Süspansiyonunu hazırladıktan sonra,% 0.2 Rose Bengal varlığında santimetre kare başına 4.38 joule yeşil ışığa maruz bırakın.
Hayatta kalan mantarları T-1 olarak belirtin. Hayatta kalan mantarları aynı PDT dozuna maruz bırakın. C-Glabrata'nın minyon mutantları, normal büyüklükteki tedavi edilmemiş ebeveyn mantarlarına kıyasla daha yavaş bir büyüme sergiledi.
Tek bir antimikrobiyal Fotodinamik Terapi Tedavisi, kontrole kıyasla C-Glabrata büyümesini üç gecikme ile önemli ölçüde inhibe etti. Antimikrobiyal Fotodinamik Tedavi Tedavisinden 24 saat sonra C-Glabrata, büyük ve küçük minyon kolonilerle iki modlu bir koloni boyutu dağılımı gösterdi. Beyaz rengi koruyan minyon koloniler Mitokondriyal Disfonksiyon sergilerken, bazı küçük kırmızı renkli koloniler ve normal büyüklükteki koloniler Normal Mitokondriyal Fonksiyonu korudu.