Arabidopsis thaliana Köklerinde Bacillus velezensis Kolonizasyonunun Kantitatif Olarak Değerlendirilmesi

Başlamak için iki mililitrelik tüpleri tartın ve ilk ağırlığı w0 olarak kaydedin. Birlikte kültürlenmiş Arabidopsis thaliana kök dokularını hasat edin ve steril suda üç kez yıkayın. Fazla suyu çıkarmak için kökü filtre kağıdına yerleştirin.

Kökleri önceden tartılmış mikro santrifüj tüpüne aktarın. Kökleri tüp ile tartın ve w1 olarak kaydedin. Daha sonra, tüpe 1 mililitre PBS ekleyin ve maksimum hızda sekiz dakika boyunca Vorteks yapın.

Kök kolonize bakteri hücrelerini içeren süspansiyonları 1'e 10'dan negatif 1'e kadar seyreltin.'ye 1'e 10'a kadar negatif 5'e kadar. Seyreltilmiş bakteri süspansiyonlarını Luria-Bertani agar plakalarına yayın ve 37 santigrat derecede 10 saat inkübe edin. Kuluçka işleminden sonra, Luria-Bertani agar plakalarındaki bakteri kolonilerini sayın.

Karşılık gelen seyreltmeye göre koloni oluşturan birimleri hesaplayın ve kök gramı başına kolonize olan bakteri hücrelerinin sayısını elde etmek için verileri kök taze ağırlığı ile normalleştirin. Aşılamadan iki gün sonra, Bacillus velezensis yabani tip SQR9 ve türetilmiş bir mutant olan delta 8mcp'nin kolonizasyonu, delta 8mcp'nin kök kolonizasyonunda önemli bir azalma gösterdi, bu da bu durumun ve yöntemin bakteri kolonizasyonunu ölçmedeki etkinliğini düşündürdü.