Aflatoksijenik Aspergillus flavus NRRL 3357'yi 30 santigrat derecede altı gün eğimli bir patates dekstroz burgu üzerinde büyüttükten sonra, mantar sporlarını Tween 20 içeren 10 mililitre su ile test tüpünden çıkarın. Test tüpünü 20 saniye boyunca vorteksleyin. Mantar sporu süspansiyonunu bir huni içine yerleştirilmiş cam yünü ile süzün ve seyreltme için girdaplı süzüntüyü kullanın.
Filtrelenmiş süspansiyonun 100 mikrolitrelik bir alikotunu 9.9 mililitre su ile seyreltin. Girdaplamadan sonra, sporları bir hemositometre ile sayın. Ekrandaki formülü kullanarak, orijinal süspansiyonun bir hacmini eğimden mikrolitre başına 1000 spora seyreltmek için gereken su hacmini hesaplayın.
Hesaplanan su miktarına orijinal süspansiyonun bir hacmini ekleyin. Ardından, fıstık kabuklarını yavaşça kırın ve kabuklarını çıkarın. Tohumları steril bir behere yerleştirin.
Beher% 70 dolana kadar% 0.05 hidrojen peroksit çözeltisi ekleyin ve tohumların üç saat boyunca suyu emmesine izin verin. Hidrojen peroksit çözeltisini tohumlardan boşaltın ve tohumları kaplamak için yaklaşık% 80 etanol su karışımının yaklaşık üç katını ekleyin. Bir dakika kuluçkaya yatırın.
Daha sonra tohumları eşit miktarda steril damıtılmış su ile iki kez durulayın. Beş kat hacimli% 3 hidrojen peroksit çözeltisini behere ekleyin ve beş dakika bekletin. Hidrojen peroksit çözeltisini boşalttıktan sonra, tohumları eşit miktarda steril su ile iki kez durulayın.
Kapağa 90 milimetre çapında bir filtre kağıdı yerleştirin ve kağıdı bir mililitre steril su ile nemlendirin. Kapağı tabağın üzerine yerleştirin. Tohumları steril bir kağıt havlu üzerine koyun.
Forseps kullanarak tohumun kabuğunu çıkarın. Dehidrasyonu önlemek için kabuğu alınmış tohumları derhal Petri kabına koyun. Embriyonik ekseni içeren tohumun yaklaşık üçte birini kesin.
Tohumu kotiledonlara bölün ve keskin bir matkap ucu kullanarak, her bir kotiledonun dış tarafının ortasına yaklaşık 1,5 ila iki milimetre derinliğinde delin. Delinmiş dört ila altı tohum parçasını %1,5'lik bir burgu kabına yerleştirin. 10 mikrolitrelik bir pipet kullanarak, her bir yarım kotiledon parçasının delinmiş boşluğuna iki mikrolitre spor süspansiyonu ekleyin.
Çanağı bir kapakla örttükten sonra, 72 saat boyunca ışıksız 30 santigrat derecede inkübe edin.
