Başlamak için, açlıktan ölmek üzere olan L1 evresi Caenorhabditis elegans larvaları tarafından işgal edilen bir nematod büyüme ortamı veya NGM plakası seçin. Bir mililitre steril su kullanarak, solucanları plakadan nazikçe yıkayın. Solucan popülasyonunun yaklaşık 300 mikrolitresini konsantre OP50 ile tohumlanmış NGM plakalarına alıkoyun.
Bir plaka kurutucu veya bir Bunsen brülörü kullanarak plakaların kurumasına izin verin ve ardından önemli bir popülasyon gravid yetişkinleri haline gelene kadar 20 santigrat derecede inkübe edin. Solucanları toplamak için, 10 mililitreye kadar steril su ile plakadan yıkayın ve ılık su karışımını 15 mililitrelik konik bir tüpe aktarın. Solucanların yaklaşık dört dakika boyunca tüpün dibinde yerçekimi ile yerleşmesine izin verin.
Küçük bir pipet ucu kullanarak, süpernatanı dikkatlice aspire edin ve atın. Ardından 15 mililitreye kadar steril su ekleyin. Son yıkamadan sonra, süpernatanı çıkarın ve taze hazırlanmış bir ağartıcı ve sodyum hidroksit çözeltisinden beş mililitre ekleyin.
Solucanları oda sıcaklığında beş dakika kuluçkaya yatırın ve her dakika en az 10 saniye girdap yapın. Bir diseksiyon mikroskobu kullanarak ilerlemeyi izleyin. Tüm yetişkinler açıldıktan veya çözüldükten sonra, reaksiyonu nötralize etmek için M9 tamponu ekleyin ve son hacmi 15 mililitreye getirin.
Daha sonra tüpü 1.300 G'de iki dakika santrifüjleyin, yumurtaları santrifüjleme yoluyla 13 mililitre M9 tamponu ile iki kez daha yıkayın, ardından 15 mililitre S tam tamponu ile tek bir yıkama yapın. Daha sonra yumurtaları 1.300 G'de iki dakika santrifüjleyin, santrifüjlemeden sonra süpernatanı aspire edin ve 10 mililitre S tam tampon ekleyin. Tüpü bir mutatör veya benzeri bir cihaz kullanarak gece boyunca oda sıcaklığında hafifçe döndürün.
Bir diseksiyon mikroskobu kullanarak, solucanların yumurtadan çıkıp çıkmadığını değerlendirin. Solucanları mikroskop altında 10 mikrolitrelik S tampon damlalarında sayın. Karbenisilin, amfoterisin B ve OP50 içeren S tam ortamında mililitrede 60 solucan içeren sıvı bir solucan karışımı hazırlayın.
A'dan G'ye kadar olan sıralara 120 mikrolitre solucanlı ortam ekleyin ve H satırına orta düzeyde solucan eklemeyin.Ardından, kirlenmeyi ve buharlaşmayı önlemek için plakayı bir bant kapatıcı ile kapatın. Mühürlü plakaları, hayvanlar L4 solucanı haline gelene kadar 20 santigrat derecede yaklaşık 65 saat inkübe edin. Hayvanları L4 aşamasında sterilize etmek için her bir oyuğa 30 mikrolitre 0.6 milimolar florodeoksiüridin stok çözeltisi ekleyin.
Bant kapatıcılar kullanarak plakayı yeniden kapatın ve bir mikrotitre plaka çalkalayıcı üzerinde 800 RPM'de 20 dakika çalkalayın. Plakaları 20 derecelik inkübatöre geri koyun. Ertesi gün, ilgilenilen ilacı bir gün kültürüne ekleyin.
Plakaları bant kapatıcı ile tekrar kapatın ve bir plaka çalkalayıcı üzerinde 800 RPM'de 20 dakika çalkalayın. Ardından, kapağı çıkardıktan ve contayı kapattıktan sonra, birinci gün ölçümü için OD600'ü bir plaka okuyucuda ölçün. Plakaları tekrar kapatın ve 20 derecelik bir inkübatöre geri koyun.
Ters çevrilmiş bir mikroskop kullanarak, tercihen iki kez objektif ile, her bir oyuktaki solucan popülasyonunu sayın ve sayıları bir elektronik tabloya kaydedin. Saydıktan sonra, plakaları 20 derecelik inkübatöre geri koyun. Doz yanıt eğrisinin, serotonin konsantrasyonunun bir fonksiyonu olarak gıda alımındaki tam bir değişiklik, N2 suşunun doza bağlı bir şekilde aşırı yiyebileceğini gösterdi.
Daf-16 mu86 mutantı, N2'den daha yüksek bazal besleme sergiler. Bununla birlikte, serotonine N2 suşu ile aynı doza bağlı şekilde yanıt veremez. Loxapine ile tedavi edilen ancak x-ışınları, gama ışınları veya paraformaldehit tarafından öldürülen bakterilerle beslenen solucanların gıda alımında önemli bir fark gözlendi. Bir dizi genetik suşun gıda alımının karşılaştırılması, exc-4 ve cgr-1 mutantlarının daha az yediğini, srp-6 mutantlarının ise daha fazla yediğini gösterdi.
