Farenin tüylerini uyuşturduktan ve çıkardıktan sonra, otoklav cerrahi matına sarılmış bir ısıtma yastığına yerleştirin. Vücudu nazikçe düzeltin ve cildi omurga boyunca kaldırın. Farenin bir tarafına, çadırlı derinin ortasına tek bir nokta çizmek için cerrahi bir işaretleyici kullanın.
BXPC'yi büyüttükten sonra, iki hafta boyunca üç insan pankreas kanseri hücre hattı. Şişeyi inkübatörden çıkarın ve biyolojik güvenlik kabinine yerleştirin. Ortamı aspire edin ve hücreleri beş mililitre PBS ile yıkayın.
Şişeye beş mililitre hücre ayrışma maddesi ekleyin ve 37 santigrat derecede% 5 karbondioksit ile altı ila yedi dakika inkübe edin. Hücre süspansiyonunu 15 mililitrelik bir tüpe aktarın ve beş dakika boyunca 500 G'de santrifüjleyin. Süpernatanı çıkardıktan sonra, hücreleri tam büyüme ortamında yeniden süspanse edin.
Bir hemo-sitometre kullanarak, hücre konsantrasyonunu ve toplam hücre sayısını belirleyin. Fare başına 250.000 hücre içeren 1.5 mililitre süspansiyonu santrifüjleyin ve beş dakika boyunca 500 G'de aşılayın. Süpernatanı çıkardıktan sonra, peleti aşılanacak fare başına 10 mikrolitre PBS'de yeniden süspanse edin ve tüpü buzun üzerine yerleştirin.
Soğutulmuş pipet uçlarını kullanarak, tüpe çözünmüş bir bazal membran ekleyin. Soğutulmuş 29 gauge insülin iğnesini 20 mikrolitre hücre süspansiyonu ile yükleyin ve şırıngayı buzun üzerine yerleştirin. İğneyi farenin yer işaretli noktasına yaklaşık bir santimetre kadar sokun ve iğnenin eğimli tarafı yukarı bakacak şekilde yer işaretine gelene kadar derinin altında hareket ettirin.
20 mikrolitre hücre süspansiyonu enjekte edin ve şırıngayı çıkarmadan önce 45 saniye bekleyin. Fareyi anesteziden çıkardıktan sonra, ev kafesine dönmeden önce ambulatuvar hale gelene kadar bekleyin.
