Başlamak için, DNA saflaştırma manyetik boncuklarını iki ila sekiz santigrat derece buzdolabından çıkarın. Karıştırdıktan sonra boncukları 2.500G'de 10 saniye santrifüjleyin. Adaptörle bağlanmış reaksiyon ürününü 1.5 mililitrelik düşük absorpsiyonlu bir mikro santrifüj tüpüne aktarın.
Her tüpe 45 mikrolitre DNA saflaştırılmış manyetik boncuk ekleyin. Bileşenleri girdapladıktan sonra, tüpü 10 saniye santrifüjleyin, ardından tüpü üç dakika boyunca manyetik bir rafa yerleştirin. Boncukları pipetlemeden süpernatanı dikkatlice atın.
Şimdi 300 mikrolitre% 75 taze hazırlanmış etanolü her bir mikro santrifüj tüpüne aktarın. Tüpleri 180 derece açıyla dört kez yavaşça döndürün. Çözelti temizlendikten sonra, boncukları pipetlemekten kaçınırken süpernatanı derhal atın.
Ardından, tüpleri mıknatıs rafından çıkardıktan sonra tüpleri kısa bir süre santrifüjleyin. Tüpleri mıknatıs rafına yerleştirin ve kalan sıvıyı pipetleyin. 1,5 mililitrelik mikro santrifüj tüplerinin kapaklarını açın ve boncukların oda sıcaklığında beş dakika kurumasını bekleyin.
PCR ile ilgili reaktifleri çözdükten ve girdapladıktan sonra, reaktifleri 10 saniye santrifüjleyin. 1.5 mililitrelik mikro santrifüj tüpünü mıknatıs rafından çıkarın ve PCR reaktifleri ekleyin. Tüp duvarına ve kapağına sıvı damlalarını önlemek için vorteks tüpünü kısa bir süre santrifüjleyin.
Ardından PCR ürününü yeni bir PCR tüpüne aktarın. Bir termal döngüleyici üzerinde inkübe edin ve DNA ve CDNA örnekleri için amplifikasyon programını çalıştırın. İnkübasyondan sonra, PCR tüpünü 10 saniye santrifüjleyin ve ürünü yeni bir 1.5 mililitre düşük absorpsiyonlu mikro santrifüj tüpüne aktarın.
Her tüpe 25 mikrolitre DNA saflaştırılmış manyetik boncuk ekleyin ve girdaplama ile iyice karıştırın. Tüpü düşük hızda santrifüjleyin ve oda sıcaklığında beş dakika inkübe edin. Ardından, çözelti temizlenene kadar tüpleri üç dakika boyunca manyetik bir rafa yerleştirin.
Süpernatanı yeni mikro santrifüj tüplerine aktarın ve boncukları pipetlemekten kaçının. 300 mikrolitre% 75 taze hazırlanmış etanolü tüplere aktarın ve boncukları daha önce gösterildiği gibi manyetik bir raf kullanarak iki kez yıkayın. Tüpleri kısa bir süre santrifüjledikten sonra, tüpleri rafa yerleştirin ve kalan sıvıyı pipetleyin.
1,5 mililitrelik tüplerin kapaklarını açın ve boncukları oda sıcaklığında beş dakika kurutun. Tüplere 50 mikrolitre eluant pipetleyin. Tüpleri girdapladıktan sonra kısa bir santrifüjleme yapın.
Tüpleri, çözelti berraklaşana kadar üç dakika boyunca manyetik bir rafa yerleştirin. Sıvıyı dikkatlice yeni bir tüpe aktarın ve kitaplık adıyla etiketleyin.
