Başlamak için, murin sekonder lenfoid dokularından izole edilen canlı T lenfositlerinin hızlandırılmış görüntülemesini gerçekleştirin. T hücresi migrasyon analizi için Velocity yazılımını açın ve yeni bir görüntü dizisi oluşturun. Tüm zamanların hızlandırılmış video mikroskobu filmlerini seçin ve Velocity'deki mavi alana taşıyın.
Kontrast geliştirme aracını kullanarak parlaklığı ve kontrastı değiştirin, ardından görüntü boyutlarını 0.325x için 20 mikrometre ve 0.65x büyütme için 10 mikrometre olarak ayarlayın. Zaman noktalarını ayarlamak için diziyi yapılandırdıktan sonra, ölçüm sekmesine gidin ve tüm zaman noktalarının işaretini kaldırın. Ardından, yoğunluğu kullanarak nesneleri bulun ve çubuğu zirvenin sağına kaydırın.
Hücre kalıntılarını önlemek için, çapı 10 mikrometreden küçük ve 100 mikrometreden büyük tüm hücreleri hariç tutun. Statik nesneleri yoksay seçeneğini işaretleyin ve ardından kırık parçaları otomatik olarak birleştir'i işaretleyin. Yeni bir protokol kaydetmek için ölçümler'e gidin.
Protokolü kaydet'e ve ardından yeni protokol adlandır'a tıklayın. Ölçüm sekmesinde, tüm zaman noktalarını ölç'e tıklayın ve parçaları zaman aralığına göre yüksekten düşüğe sıralayın. İyi parçalara sahip hücreler için parça kimlik numaralarını kaydettikten sonra, dosyayı virgülle ayrılmış metin olarak dışa aktarın ve verileri istenen analiz yazılımına aktarın.
Manuel izleme gerçekleştirmek için J görüntüsünü açın, eklentilere gidin ve izleme ve manuel izlemeyi seçin. X by Y kalibrasyonu, piksel boyutu ve Z kalibrasyonu zaman aralıklarını ayarlayın. Ardından, tek tek hücre izlemeyi başlatmak için parça ekle'ye tıklayın.
İlk zaman noktasında bir hücre seçin ve tüm zaman noktalarında devam edin. Son olarak, parçayı sonlandır'a tıklayın. Yazılım destekli hücre izleme, farklı renkli çizgilerle gösterildiği gibi aktive edilmiş bireysel T hücrelerinin göç davranışlarını karakterize etti.
