SARS-CoV-2 ile Enfekte Hücrelerden Viral Partikülleri Yakalamak için ACE2 ve Kontrol Antikorlarının Manyetik Mikrokürelere Konjugasyonu

Başlamak için, NeutrAvidin'in çalışma çözeltisini 1.5 mililitrelik düşük protein bağlayıcı bir mikrofüj tüpünde MES tamponunda hazırlayın. Daha sonra MES tamponunda keçi immünoglobulin G kontrol antikorunun çalışma çözeltisini hazırlayın. Seyreltilmiş antikor çözeltisini girdap haline getirin ve tüpü santrifüjleyin.

Ardından, aktif boncuklar içeren Mikrotitre plakasını alın ve boncukları hareketsiz hale getirmek için 30 saniye boyunca manyetik bir plaka ayırıcı üzerine yerleştirin. Mikrotitre plakası hala manyetik ayırıcı üzerinde konumdayken, süpernatanı mıknatısla hareketsiz hale getirilmiş boncuklardan aspire edin. Daha sonra boncuk içeren uygun kuyucuklara 100 mikrolitre NeutrAvidin çözeltisi, antikor çözeltisi ve MES tamponu ekleyin.

Mikrotitre plakasını kapatın ve oda sıcaklığında karanlıkta 650 RPM'de bir orbital çalkalayıcı üzerinde iki saat inkübe edin. Ardından boncukları otomatik bir yıkayıcı kullanarak PBST ile yıkayın. Gece boyunca inkübasyondan sonra, rekombinant insan biyotinile ACE2 ve biyotin çalışma çözeltisini 10 milimolar PBS'de hazırlayın.

Manyetik plaka ayırıcı üzerindeki mikro küreleri 30 saniye boyunca hareketsiz hale getirin ve daha önce gösterildiği gibi süpernatanı mıknatısla hareketsiz hale getirilmiş mikro kürelerden aspire edin. Mikrotitre plakasını manyetik ayırıcıdan çıkarın ve her bir oyuğa 50 mikrolitre 10 milimolar PBS ekleyin. Daha sonra 100 mikrolitre biyotinile ACE2 ve biyotin çalışma solüsyonunu NeutrAvidin konjuge mikroküreler içeren uygun kuyucuklara ekleyin.

Mikrotitre plakasını kapatın ve daha önce gösterildiği gibi bir orbital çalkalayıcı üzerinde bir saat inkübe edin. Mikroküreleri yıkadıktan sonra, ACE2 ve biyotin konjuge mikrokürecikleri saklayın.