Başlamak için, Biochips Model BC002'yi bir cam Petri kabına yerleştirin ve tüm boşlukları 45 dakika boyunca steril% 70 etanol ile yıkayın. Daha sonra boşlukları steril çift damıtılmış su ile iki kez yıkayın. Mavi uçlu 1.000 mikrolitrelik bir pipet kullanarak, üst boşluğun biyoçip zarını steril Kollajen IV solüsyonu ile kaplayın.
Çipi 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte 30 dakika inkübe edin. İnkübasyondan sonra, alt ve üst odaları magnezyum ve kalsiyum içeren steril PBS ile iki kez yıkayın. Her boşluğun üst odasını 250 mikrolitre endotel hücresi veya penisilin streptomisin içeren EC ortamı ve alt odayı 150 mikrolitre ile doldurun.
Birleşen insan göbek damarı endotel hücre kültürünü, magnezyum ve kalsiyum PBS içermeyen beş mililitre DPBS ile bir T25 şişesinde yıkayın. PBS'ye bir mililitre 0.25 tripsin ve bir milimolar EDTA ekleyin. Ve 37 santigrat derecede üç dakika inkübe edin.
İnkübasyondan sonra, tripsin aktivitesini durdurmak için beş mililitre PBS ve% 5 FCS ekleyin. 50 mililitrelik konik bir tüpte, süspansiyonu 350G'de beş dakika santrifüjleyin. Ve peleti bir mililitre EC ortamında yeniden askıya alın.
10 mikrolitre tripan mavisi lekesi içeren bir mikro santrifüj tüpüne 10 mikrolitre bir ila 10 seyreltilmiş hücre süspansiyonu ekleyin. Hücreleri bir Neubauer haznesi ile manuel olarak sayın. Saydıktan sonra, biyoçipin üst odasındaki endotel hücre ortamını, altı insan göbek veni endotel hücre kültürünün gücüne 0.4 kez 10 içeren 200 mikrolitre EC ortamı ile değiştirin.
Biyoçiplerin bulunduğu cam Petri kabını 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksit ile yerleştirin. Üst hazne için 300 mikrolitre EC ortamı ve alt hazne için 200 mikrolitre RPMI+orta ile günlük ortam değişimi gerçekleştirin. Monositleri bir mililitre PBS ile yıkadıktan sonra, lidokain ve EDTA içeren önceden ısıtılmış PBS'de 37 santigrat derecede ve% 5 karbondioksitte yedi dakika boyunca inkübe edin.
Hücreleri yedi dakika boyunca 350G'de toplayın ve santrifüjleyin. Bir mililitre RPM'de yeniden askıya alındıktan sonra + hücreleri daha önce gösterildiği gibi sayın. Tohum 0.1 çarpı 10 üzeri altı monositin gücü 200 mikrolitre RPMI+ alt odada.
Biyoçip portlarını, hücrelerin zara yapışması için aşağı bakacak şekilde yerleştirin.
