Sterilize edilmiş hortumu biyoçipe bağlamadan önce, hortumu önce 200 mikrolitre PBS, ardından 200 mikrolitre EC ortamı ile yıkayın. Üst ve alt hazneyi yeni hazırlanmış hücre kültürü ortamı ile yıkadıktan sonra, rezervuarı biyoçipin çıkış tarafına yerleştirin ve rezervuarı boru ile biyoçipin girişine bağlayın. Dairesel orta bolluk için, boruyu rezervuara ve biyoçipe bağlayın.
Şimdi rezervuarı 500 mikrolitre EC ortamı ile doldurun. Dakikada 21 mikrolitrelik bir akış hızında bolluğu başlatmak için biyoçipi tüpe bağlayın. Ertesi gün, bolluğu durdurun ve rezervuarları boşaltın.
Steril bir güvenlik kabini altında, rezervuarlara 500 mikrolitre EC besiyeri pipetleyin ve alt hazneyi 200 mikrolitre RPMI artı orta ile nazikçe yıkayın. Ardından perfüzyonu dakikada 21 mikrolitre akış hızında yeniden başlatın. 12. günden 14. güne kadar bir hava sıvısı arayüzü oluşturmak için, alt haznedeki tapaları açın ve bir hava kabarcığı görünene kadar ortamı dikkatlice ıslatın.
Kanal ve haznedeki tüm sıvının çıkarıldığından emin olduktan sonra, portları dikkatlice kapatın, rezervuarı yeni hazırlanmış vasküler EC besiyeri ile doldurun ve 14. güne kadar sadece üst haznede bolluk kültürüne devam edin. Biyoçipleri akış sisteminden ayırın. Boruyu çıkardıktan sonra, hücre birleşmesi için mikroskop altında biyoçipten hücre katmanlarını inceleyin.
Hücre kültürü ortamını çıkarmak için biyoçip boşluklarını PBS ile yıkayın. PBS'de 300 mikrolitre %4'lük paraformaldehit solüsyonunu üst hazneye ve 200 mikrolitre alt hazneye ekleyin. 10 dakikalık inkübasyondan sonra, odayı PBS ile üç kez yıkayın.
Permeablizasyon için, PBS'ye 300 mikrolitre% 0.25 Triton X 100 ekleyin ve 30 dakika inkübe edin, PBS ile yıkadıktan sonra, her iki bölmede PBS'de 300 mikrolitre% 3 sığır serum albümini pipetleyin ve bir saat inkübe edin. İmmünofloresan boyama için, uygun seyreltme oranlarını kullanarak her zar için% 3 BSA kullanarak 50 mikrolitre antikor çözeltisi hazırlayın. Biyoçip içindeki hücrelere erişmek için, boşluğun dışından tam bir kesik yapın ve yapıştırma folyosunu çıkarın.
Bir neşter kullanarak, biyoçipe kapatılmış kenarları çıkararak zarı kesin. Membranı iki parçaya böldükten sonra, zar parçalarını bir cımbızla toplayın ve boyama için mikroskobik bir slayt üzerine yerleştirin, her bir zar parçasına 50 mikrolitre antikor çözeltisi ekleyin ve ışıktan koruyarak gece boyunca dört santigrat derecede inkübe edin. Membranı PBS ile üç kez yıkadıktan sonra, etiketli lam üzerine bir damla montaj ortamı ekleyin ve ilgili membranı yerleştirin.
Membranın üstüne bir damla montaj ortamı ekleyin ve bir kapak camı yerleştirin. İnsan umbilikal ven endotel hücrelerinin immünofloresan boyaması, 14 günlük ko-kültürden sonra morfolojik değişiklikler ve markoprotein ekspresyonu ortaya çıkardı. Vasküler tarafta, endotel hücre sınırlarında V uyumlu ifade, birleşme ve endotel bariyeri oluşumunu düşündürdü.
Epitel tarafı, alveoler epitel bütünlüğünü ve fonksiyonunu gösteren ecaherrin ve sürfaktan protein A ekspresyonu açısından değerlendirildi.
