Başlamak için, 24 saatlik bir Pseudomonas aeruginosa kültüründen 1,2 mililitreyi 1,5 mililitrelik bir santrifüj tüpüne pipetleyin. Tüpü 3000 G'de üç dakika boyunca dört santigrat derece santrifüjleyin. Süpernatanı temiz bir tüpte toplayın.
333 mikrolitre süpernatanı temiz bir tüpe pipetleyin. Sonra tüpe bir mililitre eter ekleyin. Çözeltiyi 30 saniye boyunca bir girdapta karıştırın.
Tüm tüpler girdaplandıktan sonra, iki dakika boyunca dört santigrat derecede 3000 G'de santrifüjleyin. Daha sonra organik fazı toplayın ve temiz bir tüp tüpüne aktarın. Çözeltiyi kuruyana kadar bir davlumbaza yerleştirin.
Daha sonra,% 60 sülfürik asit çözeltisi hazırlamak için folyo kağıtla kaplı temiz bir şişeyi beş dakika boyunca buza yerleştirin. Orsinol reaktifini hazırlamak için bu sülfürik asit çözeltisini kullanın. Bir cam tüpe her bir Ramnolipid örneğinden 100 mikrolitre ekleyin ve örneklere 900 mikrolitre orsinol ekleyin.
Çözeltileri karıştırdıktan sonra, numuneyi 80 santigrat derecede bir su banyosunda 30 dakika inkübe edin. Tüp oda sıcaklığına soğuduğunda, bir numuneyi bir litre hücreye aktarın ve 421 nanometredeki absorbansı okumak için spektrofotometreye yerleştirin. PA14 suşu en yüksek miktarda ramnoz eşdeğeri üretirken, PA7 suşu en düşük miktarı üretir.
